Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡相关微小RNA的筛选-中华危重病急救医学.PDF

·546 · 中华危重病急救医学 2013 年 9 月第 25 卷第 9 期 ChinCritCareMed ，September2013 ，Vol.25 ，No.9 ·论著· Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡相关微小 RNA 的筛选 戢慧 陈淼 钱明江 李康 刘国跃 覃松 【摘要】 目的 利用基因组芯片筛选 Ⅱ型肺泡上皮细胞 （AECⅡ ） 凋亡相关微小 RNA （microRNA ， miRNA ），以期为临床防治高氧性急性肺损伤（HALI ）提供新策略。 方法 原代培养雄性 SD 大鼠 AECⅡ36h ，加 入 0.5mmol/LH O 诱导建立 AECⅡ凋亡模型， 透射电镜下鉴定 AECⅡ并观察凋亡细胞形态； 于制模前及制模后 2 2 2.5、6、12、24h 收集细胞，流式细胞术检测细胞凋亡率；基因芯片技术筛选 AECⅡ凋亡相关 miRNA ，并采用实时 荧光聚合酶链反应（RT-PCR ）对基因芯片结果进行验证。结果 透射电镜下观察可见特征性的微绒毛及嗜锇性 板层小体，鉴定为 AECⅡ 。透射电镜下可见细胞质回缩，染色质凝聚、边聚，细胞表面微绒毛稀少，嗜锇性板层小 体排空。H O 损伤细胞后，细胞凋亡率较空白对照组显著增加，且随损伤时间延长而逐渐上升〔制模前及制模后 2 2 2.5、6、12、24h 分别为 （9.43±1.02 ）%、（18.38±2.91）%、（28.57±1.18 ）%、（35.83±2.66 ）%、（57.68±2.22 ）% ，两 两比较 P ＜0.05〕。 与制模前相比， 制模24h 细胞伴有多种 miRNAs 的差异表达， 其中 rno-miR-449a-5p、 rno-miR-34b/c-5p、rno-miR-200a/c-3p、rno-miR-146a-5p、rno-miR-141-3p、rno-miR-21-5p 、rno-miR-375-3p 、 rno-miR-29b-3p 、rno-miR-214-5p 、rno-miR-210-5p 及 rno-miR-214-3p 与凋亡密切相关。 RT-PCR 结果验证 凋亡相关 miRNAs 结果与芯片结果一致。 结论 利用基因组芯片筛选 AECⅡ凋亡相关 miRNA ，其中 miR-34 家 族可能是 AECⅡ凋亡调控的主要参与者。 rno-miR-21-5p 可能是 AECⅡ 内重要的抗凋亡基因。 【关键词】 肺泡上皮细胞， Ⅱ型； 凋亡； 微小 RNA ； 基因芯片 Screening type Ⅱ alveolar epithelial cell apoptosis related microRNA JI Hui ， CHEN Miao ， QIAN Ming - jiang ， LI Kang ， LIU Guo -yue ， QIN Song. Department of Critical Care Medicine ， Affiliated Hospital of Zunyi Medical College ， Zunyi 563000 ， Guizhou ， China Corresponding author ： CHEN Miao ， Email ： chenmiao64@163.com 【Abstract 】 Objective To screen type Ⅱ alveolar epithelial cell （AEC Ⅱ ）apoptosis related microRNA （miRNA ）withgenechiptechnology ， provideanewstrategyforthepreventionandtreatmentofhyperoxia-induce