抑制性消减杂交技术（SSH）在辣椒抗病基因研究中的应用.PDFVIP

渊学 术 版 冤 - 1 - 允韵哉砸晕粤蕴韵云悦匀粤晕郧允陨粤晕郧灾耘郧耘栽粤月蕴耘杂 2009渊12冤院1原4 DOI:10.3865/j.issn.1001-3547.2009.12.001 抑制性消减杂交技术（SSH）在辣椒 抗病基因研究中的应用 1 2 1 1 肖仲久 李小霞 张素勤 蒋选利 渊1.贵州大学农学院袁贵阳袁550025曰2.遵义师范学院生物系冤 摘 要 基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的抑制性消减杂交技术袁因其假阳性率低尧敏感性高尧效率高等优点 广泛应用于植物基因差异表达研究遥 对该技术的原理尧主要优缺点及其在辣椒植物抗病性机制研究中的应用进行了综 述遥 关键词 抑制性消减杂交技术 植物抗病性 辣椒 [4] 众多研究表明袁植物的生长尧发育尧衰老和死亡袁 高尧假阳性率低等优点被广泛用于生命科学各个领域 遥 组织和细胞的分化尧凋亡及变异都与基因的选择性差 在辣椒生产上袁各产区的辣椒生产从播种到收获 异表达有关[1]遥因此袁分离并克隆差异表达基因被广泛 均受到不同程度的病害为害遥主要有猝倒病尧立枯病尧 应用于植物的改良尧抗逆尧抗病等研究中遥 目前袁基 灰霉病尧白粉病尧青枯病尧枯萎病尧病毒病尧晚疫病尧炭 [5] 克隆主要从3个不同的水平上进行研究袁即院基因组 疽病尧疮痂病及线虫病等 遥 因此袁积极开展病害病 水平尧转录水平和蛋白质组水平遥 由于真核基因组中 诊断尧 治疗和抗病基因功能与机制的研究是当务之 只有15%的基因得到表达袁从转录水平进行基因的寻 急遥 目前袁从分子水平规模筛选与辣椒病害基因的发 找和分离将会简化分析背景袁 使目标序列相对富集袁 生发展机制以及抗病基因的抗病机制密切相关的基 便于克隆和分析[2]遥因此袁从转录水平寻找和分离植物 因已成为研究热点遥 基因是最常用的方法遥基于PCR技术基础上袁涌现了 故本文就SSH技术的基本原理尧主要过程及该技 许多分离有差别表达基因的方法袁 比如袁mRNA差异 术的优缺点等进行简要介绍袁并对其在辣椒抗病基 显示技术渊mRNAdifferentialdisplayreversetranscrip鄄 研究中的应用进展作一综述遥 tionPCR 或DD冤尧 代表性差异分析技术渊representa鄄 1 抑制性消减杂交渊SSH冤技术的主要原理 tionaldifferenceanalysis或RDA冤等遥 但这些技术存在 和基本过程 着诸如院假阳性率高尧差异基因丰度差别大尧步骤繁 琐尧工作量大等问题遥 抑制性消减杂交技术渊SSH冤运用了杂交二级动力 而抑制性消减杂交 渊suppressionsubtractivehy鄄 学原理袁是一种以抑制性PCR反应为基础袁将标准化 bridization袁SSH冤 是基于抑制PCR和差减杂交技术建 测试cDNA单链步骤和消