HuR蛋白介导mRNA稳定性糖尿病大鼠骨髓巨噬细胞中对炎症因子Il-6高表达影响.pdfVIP

盆刿匡鲎瞳塑±鲎焦逾塞 HllI潘白介导的mRNA稳定性在糖尿病大鼠骨髓巨噬细 胞中对炎症因子儿6高表达的影响 中文摘要 目的本实验选用GK糖尿病大鼠与Wistar正常大鼠分离培养骨髓巨噬细胞(bone marrow-drive macrophage，BMM)，分别在高糖和正常培养基中培养，利用脂多糖 平观察高糖对转录后IL．6mRNA的稳定性影响，并对其作用机制进行初步探讨。 marrow 方法通过分离大鼠骨髓细胞(bone cell，BMC)诱导分化成巨噬细胞，LPS刺 激建立炎症模型；在倒置显微镜下进行细胞形态学观察，并对分化成熟的巨噬细 胞进行免疫组化鉴定；实验分为：GK高糖组、Wistar正常组；ELISA试剂盒测细胞 上清中炎症因子IL．6的含量；实时荧光定量PCR(Real．Time PCR，RT-PCR)检i赆i]IL．6 mRNA水平；Western Bloti贝lJ定人抗原R(HumanantigenR，HuR)蛋白的胞浆胞核及其 总表达水平； RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RNA．bindingprotein 结果原代培养的骨髓巨噬细胞生长良好，光镜下可观察到细胞贴满培养板底呈椭 圆形、三角形、星形或不规则形，有许多伪足和突起，胞浆丰富；共聚焦显微镜 下观察SP法对骨髓巨噬细胞鉴定CD68阳性表达率达99％以上；ELISA结果显示炎 症因子IL．6的水平在高糖组高于『F常组，两组间差异有统计学意义：RT-PCR显示 在高糖组IL．6mRNA的相对含量高于正常组，两组间比较差异有统计学意义； WesternBlot显示正常对照组胞浆HuR的表达含量随LPS*U激时间变化差异无统计 学意义，高糖组胞浆HuR的水平随LPS*U激的时间延长逐渐增加，胞核HuR的水平 逐渐降低，两组间胞浆胞核，营,HuR蛋白表达水平比较差异无统计学意义；RIP检测 显示HuR—mRNA复合物中IL．6mRNA含量高糖组高于正常对照组，两组间比较差异 有统计学意义。 硷刿匡茔瞳亟±鲎焦逢塞 结论本实验通过利用LPS诱导的体外炎症模型，并利用放线菌素D抑制IL一6mRNA 定性，使IL一6mRNA稳定性增强。 关键词骨髓巨噬细胞；炎症因子；mRNA稳定性；RNA结合蛋白；人抗原R 4 Theeffectof factorIL-6 inflammatoryhighexpression inthe the HuRmediatedmRNAstabilization protein through diabeticrats’bonemarrow-drive macrophage Abstract and marrow-drive GK Weisolateandculturebone macrophage(BMM)from Objective Wistar use inducethe model．This inflammatory rat，andlipopolysaccharide(LPS)to use Dtoinhibitthe of