猪链球菌2型四川株溶血素主要抗原决定簇.PDFVIP

维普资讯 2007，23 (11) 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 1111 文章编号 ：1002—2694(2007)11— 1111—03 猪链球菌2型四川株溶血素主要抗原决定簇 基因的克隆及表达* 王 华h，王君玮 ，陈义平 ，徐天刚 ，张 维 ，赵云玲 ，王志亮 摘 要：目的 研究有效的猪链球菌病疫苗 。方法 采用 PCR方法 ，以四川株 、参考菌株和江苏分离株猪链球菌 2型基 因组 DNA为模板扩增溶血素基因，克隆至PMD18一T载体。提取阳性质粒 ．进行 PCR和酶切鉴定 。经测序正确后，构建原核 表达载体 pET32a—SLY，将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，经 IPTG进行诱导。结果 重组菌苗体裂解物经 SDS- PAGE电泳可检测到相对分子量约为43ku的重组蛋 白，表达产物经纯化后，免疫印迹法(Western-blotting)分析证实，该重组 蛋 白与SS2—6阳性血清发生特异性反应。结论 本实验 旨在通过对溶血素主要抗原决定簇基 因的克隆表达 ，分析表达产物 的 抗原性和免疫原性，为进一步对猪链球菌 2型疫苗共表达的研制奠定基础。 关键词 ：猪链球菌2型；溶血素 ；克隆；表达 中图分类号 ：S852．6 文献标识码 ：A Cloningandexpressionon thegeneencodingthemain regionepitope ofhemolysin instreptococcussuisserotype2strainfrom Sichuan W ANG Hua，WANGJun—wei，CHEN Yi—ping，XU Tian-gang， ZHANGWei，ZHAOYun—ling，WANGZhi—liang (NationalDiagnosticCenterforExoticAnimalDiseasesNationalCenterfor AnimalSanitationEpizoology，Qingdao266114，China) ABSTRACT：UsingthegenomicDNA ofStreptococcussuisserotype2strainastemplateinPCR assay，thehemolysingene ofthisstrain(SLY)wasamplifiedandwasclonedintovectorpMD18一T．Theplasmidofthepositivecloneswasextracted，diges— tedwithrestrictionendonucleasesanddetectedbyPCR．Aftersequencedeterminationandanalysis，theprokaryoticexpression vectorpET32a-SLY wasconstructed。andtherecombinantplasmidwasthentransfectedtOE．coliBL21(DE3)．Itwasfound thatthefusionproteinwitharelativemolecularweightofabout43000couldbedetectedbyusingSDSelectrophoresis onthelysatesofrecombinantbacterialcultures．AsdemonstratedbyW esternblotanalysis，specificreactioncouldbedemon— stratedbetweentherecombinantproteinandpositiveserum againstSS2—6．Theseresultsseem tOprovidebasisforthefurther studiesonthe