基因工程原理(徐晋麟)考前突击.docVIP

名词解释 测序酶：是经修饰过的T7噬菌体DNA聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸，这样使得T7DNA聚合酶完全失去了3~-5~外切酶活性，只有5~-3~聚合酶活性，而且聚合能力很强，测序时常用此酶。与klenow相比优点是：是双脱氧链终止法对长片段进行测序的理想用酶。 限制性核酸内切酶：是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。 限制-修饰系统中的限制和修饰作用：限制-修饰系统中的限制作用是指一定类型的细菌可以通过限制性酶的作用，破坏入侵的外源DNA(如噬菌体DNA等)，使得外源DNA对生物细胞的入侵受到限制；而生物细胞(如宿主)自身的DNA分子合成后，通过修饰酶的作用，在碱基中特定的位置上发生了甲基化而得到了修饰，可免遭自身限制性酶的破坏，这就是限制-修饰系统中的修饰作用。 载体(vector): 在基因操作中携带外源基因进入受体细胞的工具。 克隆载体：主要用于扩增或保存DNA片段，是最简单的载体。主要有：质粒载体、噬菌体载体、黏粒载体、人工染色体（YAC和BAC）。 YAC（酵母人工染色体）：是利用酿酒酵母的染色体的复制元件构建的载体，其工作环境也是在酿酒酵母中。 BAC（细菌人工染色体）：是基于大肠杆菌（E.coli）的F质粒构建的高通量低拷贝的质粒载体。 表达载体是可携带外源基因进入宿主细胞进行复制并进行转录、翻译的载体。 病毒表达载体：是以病毒基因组序列为基础，插入必要的表达元件所构建成的真核基因转移工具。 Ti质粒：是在根癌农杆菌中发现的可决定冠瘿病（即可诱发寄主植物产生冠瘿瘤）的质粒。大小在200kb左右。 粘粒载体：由人工构建的、大小一般在 5~7kb左右、含有λDNA的cos序列和质粒复制子的一类特殊的质粒载体。 一元载体：含目的DNA的中间表达载体与改造后的受体（Ti质粒）通过同源重组所产生的一种复合型载体。 双元载体：是指由两个分别含有T-DNA和vir区的相容性突变Ti质粒构成的系统。 T-DNA ：能导入宿主细胞并插入其DNA中发挥作用的Ti质粒部分DNA片段。 T-DNA区： 即转移DNA，能转移并整合在植物细胞核基因组上的、决定植物形成冠瘿瘤的一段DNA。LTS和RTS对于T-DNA的转移和整合是不可缺少的。 噬菌粒：一些载体中有许多结合了质粒和噬菌体两者的元件并且还有M13复制起始点区域，故成为噬菌粒。 α-互补 ：指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，由 1024个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。 端粒重复序列（TEL）：定位于染色体末端一段序列，用于保护线状的DNA不被胞内的核酸酶降解，以形成稳定的结构。 多克隆位点：含有紧密排列的多个限制性内切酶识别位点的一段DNA片段。 荧光原位杂交（FISH）：对寡核苷酸探针做特殊的修饰和标记，后用原位杂交方法与靶染色体或DNA上特定的序列结合，再通过与荧光素分子相偶联的单克隆抗体（单个细胞增殖形成的细胞群所产生的抗体）来确定该DNA序列在染色体上的位置。 凝胶阻滞试验：又叫DNA迁移率变动试验（EMSA），是用于体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。 盒式诱变：就是用一段人工合成具有突变序列的DNA片段，取代野生型基因中的相应序列。这就好象用各种不同的盒式磁带插入收录机中一样，故而称合成的片段为“盒”，这种诱变方式为盒式诱变。 定点诱变（寡核苷酸介导；重叠延伸PCR、大引物PCR）：是使已克隆基因或DNA片段中任何一个特定碱基发生取代、插入或缺失突变的过程。 体外随机诱变：指随机的在克隆化DNA中引入碱基置换突变。 探针：指用于检测特定基因或转录产物存在或表达的DNA、RNA或寡核苷酸序列，这些序列在使用之前需标记。 转化：把重组质粒DNA导入受体细胞（大肠杆菌、酵母、动植物细胞等）,使其遗传性状改变的过程。 转染:把重组的噬菌体或病毒导入受体细胞的过程。 相互关系：转化一词严格地说是指，感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体DNA分子的生命过程；而转染一词，则是专指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA分子的生命过程。但从本质上讲，两者并没有什么根本的差别。无论转化还是转染，其关键的因素都是用氯化钙处理大肠杆菌细胞，以提高膜的通透性，从而使外源DNA分子能够容易地进入细胞内部。 目的基因：指那些已被或者准备要被分离、改造、扩增或表达的特定基因或DNA 片段。 瞬时转化： DNA在核中保持外源染色体状态，假定他没有在宿主细胞中发挥功能的复制起始位点，那么它只能保留很短的时间就会稀释或者降解。这称为瞬时转化，其结果是转入的基因改变了细胞的性质，但这只能持续较短时间。 融合基因：是指应用DNA体外重