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生物技术概论复习指南 第一章 绪论 1、 生物技术（基本概念）: 也称为生物工程 ，是指人们以现代生命科学为基础，结合其他基础学科的科学原理，采用先进的工程技术手段，按照预先的设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或达到某种目的。 2、按照操作对象的不同，生物技术包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程 第二章 基因工程 第1节 概况 1、基本概念： 基因工程：基因工程是按照人类的需要，进行严密的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，有目的地改造生物种性，使现有的物种在较短时间内趋于完善，创造出更符合人们需求的新的生物类型和产品的技术。 2、基因工程研究的理论依据： ① 不同基因具有相同的物质基础；② 基因是可以切割的；③ 基因是可以转移的；④ 多肽与基因之间存在对应关系；⑤ 遗传密码是通用的；⑥ 基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。 3、基因工程的基本过程（切——接——转——增——检） ① 获得目的基因：从供体细胞分离出基因组DNA，用限制性核酸内切酶将外源DNA与载体分子切开。——切 同时选择运载目的基因的载体 ② 目的基因与载体DNA拼接：用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段接到载体分子上，形成DNA重组分子。——接 ③ 重组体分子导入受体细胞：借助于细胞转化手段将DNA重组分子导入受体细胞中。-转 ④ 短时间培养转化细胞，以扩增DNA重组分子或使其整合到受体细胞的基因组中。-增 ⑤ 筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞。——检 第2节 DNA重组 1、DNA的一般性质（小题） 核苷酸组成（元素组成：C、H、O、N、P（9－10%），基本构成单位——核苷酸，核苷酸由碱基、戊糖和磷酸三部分组成，碱基(base)：嘌呤碱，嘧啶碱，戊糖(ribose)：核糖，脱氧核糖 连接：碱基和核糖（脱氧核糖）通过糖苷键连接形成核苷（脱氧核苷）；核苷酸之间以3’,5’-磷酸二酯键连接形成多核苷酸链，即核酸。 链的方向：DNA的二级结构：双螺旋结构。DNA分子的半保留复制 Chargaff 规则：[A] = [T]、[G] ( [C] 2、获得目的基因片段的主要途径 ① 基本概念：同裂酶：来源不同而识别序列和切割方式相同的限制酶称为同裂酶。同裂酶产生同样的切割，形成同样的末端。 同尾酶：虽来源及识别序列不同，但产生相同的粘性末端。由同尾酶产生的DNA片段，是能够通过其粘性末端之间的互补作用彼此连接起来的。但由此形成的DNA往往不能被原来同尾酶中的任何一种重新切开。 ② Ⅱ限制性内切酶的特点：识别位点（回文序列）严格专一，并在识别位点内将双链断 ③ PCR循环内的反应程序（高温变性——低温退火——适温延伸） a模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； b模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； c引物的延伸：DNA模板--引物结合物在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链。 3、DNA片段的连接 ① DNA连接酶的定义及特点：（定义）将不同的 DNA 片段连接在一起的酶。（特点）它催化两个双链DNA片段相邻的5 ′端磷酸基团（-P）和3′端自由羟基（-OH）之间形成磷酸二酯键。 （连接方法，小题）互补的粘性末端相连、两个平末端相连、平末端与粘性末端相连 第3节 基因克隆载体 1、基本概念:基因克隆载体：是指把能够承载外源基因，并将其带入受体细胞得以稳定维持的DNA分子。 穿梭质粒：是指一类由人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞存活和复制的质粒载体。 2、基因克隆载体应具备的条件 ① 在克隆载体合适的位置必须含有允许外源DNA组入的克隆位点，并且这样的克隆位点应尽可能多（多克隆位点区）； ② 能携带外源基因进入受体细胞，并能在寄主细胞中进行独立的 DNA复制； ③ 必须含有供选择转化子的标记基因； ④ 不应含有对受体细胞有害的基因，并且不会任意转入除受体细胞以外的其他生物的细胞。 3、作为载体的质粒，其构成的组分:复制起点、选择性记号和多克隆位点区 4、噬菌体载体 ① λ噬菌体：如何对野生型λ噬菌体进行的改造？（删除多余的限制位点） （1） 减少野生型基因组分子量，切除野生型非必需区，增加克隆容量； （2） 减少单酶切位点，或增加某些方便的内切酶的酶切位点； （3） 插入某种报告