隐球菌性脑膜炎实验室检查.docVIP

隐球菌脑膜炎的实验室检测 首都医科大学附属北京地坛医院 王慧珠 ? 一、新型隐球菌的特点 新型隐球菌广泛分布于自然界中，鸽子粪是主要传染源。圆形、卵圆形，菌体为宽厚的荚膜包裹；不形成菌丝和孢子；出芽生殖。分 A 、 B 、 C 、 D 四个血清型。 A 型最多见。 致病菌属包括 17 个种和 8 个变种，主要是新型隐球菌新生变种和格特变种，已报道引起人类疾病的还有浅黄隐球菌、浅白隐球菌和罗伦隐球菌，但是很少见。 二、致病性 新型隐球菌为条件致病菌，免疫功能低下者为高发人群，但也可发生在免疫功能正常人。白血病、恶性肿瘤、艾滋病、 SLE 、尿毒症患者。长期广谱抗生素、激素、免疫抑制剂使用者更易感染。 隐球菌侵入肺部后，局部病变进展缓慢，病变轻微，常无临床症状，但有 20% 以上的病例可由此经血进入中枢神经系统，导致隐球菌性脑膜炎的发生。 三、临床表现 （一）起病缓慢、可呈亚急性，潜伏期 2-4 周。 （二）脑膜炎的表现：意识障碍，头痛、发热（以不规则热多见） 。 （三）颅内压的表现，可有颅神经损害。 （四）未经治疗病情逐渐恶化 （五）血常规正常 （六）腰穿：压力增高明显，脑脊液外观透明或微混，白细胞轻中度增多（ 40-400/ul) ，以淋巴细胞为主。蛋白轻度升高，糖减低，氯化物轻中度减低。 四、其他部位隐球菌病 （一）肺隐球菌病 （二）皮肤隐球菌病 （三）骨隐球菌病 五、新型隐球菌对 CNS（中枢神经系统） 具有亲和力？ 机理可能和脑脊液中有隐球菌所需要的天门冬酰胺、肌酸内酰胺等刺激真菌生长的营养因子有关。 六、特殊宿主的隐球菌病 隐球菌病是 AIDS 病人最重要的也是致命的真菌感染并发症，在 AIDS 人群中，发病率可达 6% ～ 10% ，而在中部非洲地区可高达 15% ～ 30% ，这可能与发达国家对于 AIDS 合并机会感染控制水平有关，即早发现、早治疗。 AIDS 病人患隐球菌病的临床表现与其他免疫受损的病人相似，然而，感染部位常含有更多的菌体， 80% 以上的病人在做出诊断时已有脑膜炎或脑膜脑炎，且病变更广泛。 AIDS 患者并发隐球菌病很少能治愈，常见持续感染和复发，有文献报道 10%~25% 的病人死于治疗期间。 七、北京地坛医院情况 我院 2009 年 1 月至 2011 年 12 月共确诊 405 例 AIDS 患者，其中隐球菌脑炎患者为 53 例，感染率 13.1% 。 其中墨汁染色阳性 25 例（ 47.2% ），真菌培养阳性 23 例（ 43.4% ），抗原检测阳性 53 例（ 100% ）。 通过单一或联合治疗，治愈 1 例（ 1.9% ），好转 40 例（ 75.5% ），未愈 6 例（ 11.3% ），死亡 6 例（ 11.3% ）。 八、诊断 对于临床上出现 CNS 感染的症状、体征、脑脊液压力明显增高及糖含量明显下降的患者，应高度警惕隐球菌脑膜炎的可能，尤其对具有免疫功能底下者、有养鸽或有鸽粪接触史者，更应高度怀疑。实验室检查具有重要的诊断价值，包含涂片镜检、培养、隐球菌特异性抗原检测和组织病理检查发现隐球菌。 九、治疗 隐球菌病的治疗包括真菌药物治疗、对症治疗、免疫制剂治疗、手术治疗及原发病的治疗等。 抗真菌治疗：两性霉素 B(0.5-0.8mg/kg/d) ，由 1mg/d 起渐加量，加入 500ml 葡萄糖液中避光静脉缓慢滴 6h 以上；或 0.5-1mg 脑室引流管缓慢抽吸。氟胞嘧啶（ 25mg/kg ， q6h) 。氟康唑（ 200-400mg/d)/ 伊曲康唑（ 100mg bid) 。 十、治愈标准 连续 3 次 CSF 涂片镜检阴性或抗原 阴性 十一、实验室检查 （一） CSF 的涂片 革兰氏染色 ：将临床送检的 CSF 标本 1500g 离心 5 分钟，将沉淀物进行涂片、墨汁染色及真菌培养，用上清夜做新型隐球菌抗原的检测。 一定要离心，容器要选择能离心的无菌塑料试管，避免二次污染。 ppt14 的图片显示的是隐球菌革兰氏染色镜下形态，可见黑色的孢子，以及夹膜抗原。 （二） CSF 的 墨汁染色 1. 方法 （ 1 ）用离心后的沉淀物进行墨汁染色。 （ 2 ）墨汁与脑脊液比例一定要合适，一般选 1 ： 2 的比例。 （ 3 ）选用优质墨汁。 重视墨汁染色，墨汁染色阳性可以直接向临床报告检测到新型隐球菌。 2. CSF 的 墨汁染色隐球菌的形态 取可疑标本置玻片上，加 1 滴墨汁混匀后加盖片镜检。墨汁染色检测隐球菌对于早期诊断隐球菌性脑炎十分重要，但墨汁染色检测隐球菌镜下形态要注意与单核细胞的区别，隐球菌本身并不被染上墨汁，但在黑色背景下为 5-20μm ，圆或卵圆形，有宽阔透明的荚膜，