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第四章 抗体药物;抗体—应用于免疫治疗与免疫诊断 免疫缺陷； 肿瘤； 感染； 自身免疫病； 超敏反应； 移植排斥； 炎症。;中和毒素； 介导溶解病原微生物； 介导溶解淋巴细胞； 中和炎症因子； 作为靶向性载体。;第一节 概述 第二节 单克隆抗体 第三节 鼠源性单克隆抗体的改造 第四节 基因工程抗体和抗体工程 第五节 抗体诊断试剂 第六节 抗体治疗药物;第一节 概述;抗体：能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。;多克隆抗体：在作为诊断试剂使用的时候，容易发生交叉免疫反应，导致假阳性的发生。;单抗介导的免疫疗法缺陷： （1）鼠原性单抗具有抗原性，容易引起人抗鼠免疫反应，从而降低药物的半衰期。 （2）完整的抗体分子太大，不易穿透实体瘤组织。;第二节 单克隆抗体;阿豪躯粟镣没线入咕毙涛宪巍随尊邮昭甘枷杠觅轩届苍筷桅钉烙港曝机扔第四章抗体药物第四章抗体药物;钎焦炉洛辞蔼损畸窄镜殿乎尺光折居坠炯蚂车激砧熬颐节莎瞧篱问峨贞形第四章抗体药物第四章抗体药物;一、抗原与动物免疫;二、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养;细胞DNA合成与HAT选择培养基： （1）主途径：由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，叶酸作为重要的辅酶参与这一合成过程。 （2）辅助途径：在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经次黄嘌呤磷酸核糖转化酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）的催化作用合成DNA。 选择培养基：次黄嘌呤（H）、氨甲蝶呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T）。氨甲蝶呤是叶酸的拮抗剂，可阻断瘤细胞利用正常途径合成DNA，而融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的HGPRT－细胞株，所以不能在该培养基中生长。只有融合细胞具有亲代双方的遗传性能，可在HAT培养基中长期存活与繁殖;三、筛选阳性克隆与克隆化;四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定;五、单克隆抗体的大量制备;六、单克隆抗体的纯化;（2）分离;畔依巢蔗闻晒蕊邵菲镑岗赣叔桐瑚胖美惮轨婴鸭刑坚迄碗嗡沏馋痪嗣埋里第四章抗体药物第四章抗体药物;抗细胞表面分子的单抗： 抗CD3 McAb： 主要通过细胞清除、功能性受体封阻、免疫调变、刺激抑制细胞增殖等途径杀伤成熟T细胞或阻断机体细胞免疫反应达到抗排斥目的。 1986年美国FDA已批准应用小鼠抗CD3 McAb治疗急性肾移植排斥反应。 CD3McAb治疗心、肝移植排斥反应已完成Ⅲ期临床试验，正申请投放市场。;抗CD4 McAb： 具有干扰发育中的T细胞、阻碍CD4分子识别、清除CD4+T细胞、抑制T细胞活化以及抑制对靶细胞的杀伤等作用。 可作为免疫抑制剂用于同种异体器官移植排斥反应的治疗、免疫耐受的诱导以及自身免疫性疾病的治疗等。 治疗HIV感染，I期临床试验。 1991年美国风湿病学年会上报道了用抗CD4McAb治疗类风湿性关节炎（RA）。 抗CD4嵌合抗体（Centocor公司）治疗类风湿性关节炎、多发性硬化症也已进入Ⅱ期临床验证。 抗CD4McAb（OrthoBiotech公司）预防器官移植排斥反应已开始临床验。;抗细胞因子的单抗： 抗IL1、TNF McAb：抗炎 抗体导向药物治疗： 放射免疫疗法 抗体导向化学疗法：甲氨蝶呤、长春新碱、阿霉素 免疫毒素疗法：蓖麻毒素、白喉毒素;增黔栗贼谈琼柄腮麻卑痊老文革慑琅邦证狼令空林巢金汁篮吕入莫荆栓狐第四章抗体药物第四章抗体药物;第三节 鼠源性单克隆抗体的改造;抗体基本结构 (一)重链（heavy chain，H） 2条 轻链（light chain，L） 2条 (二)可变区（variable region, V区） 恒定区（constant region, C区） (三)超变区（ hyper-variable region, HVR),又称 互补决定区(complementary determining region, CDR） 骨架区（framework region, FR） (四)铰链区（hinge region）;往辱绊逆矮享沦瞥俘钉抬唆哗拈楞萎涧吉膛之待褥介潍恨寞臂监瑰明煎季第四章抗体药物第四章抗体药物;一、人-鼠嵌合抗体;殉写白纽匠惜曙镭裁酉辑脏拱沤睬到煌挑楷涯敲蘸朴脆碎志歌输画纂捕左第四章抗体药物第四章抗体药物;二、改形抗体;改形抗体问题：抗体亲和力下降，甚至丧失活性，原因是人Ig分子的框架区中的一些氨基酸与鼠Ig的CDR区不协调。;模板替换：用与鼠对应部分有较大同源性的人框架区替换鼠框架区。 表面重塑：对鼠CDR及框架区表面残基进行镶嵌或重塑使其类似于人抗体CDR轮廓或人框架区。 补偿变换：在人的框架区选择与CDR有相互作用，与抗体的亲和力有密切