口腔细菌影响绿脓假单胞菌感染肺上皮细胞体外的研究.pdf

·中文论著摘要· 口腔细菌影响绿脓假单胞菌感染 肺上皮细胞的体外实验研究 目 的 牙周病是人类最常见的慢性感染性疾病。近年来，许多国内外的专家研究证 实牙周感染可能是引发全身系统疾病(如：心血管疾病、糖尿病，呼吸系统疾病、 消化道疾病、骨质疏松、低体重早产儿、疱疹病毒感染等)的危险因素D-8I。 牙周病与肺感染的关系也逐渐进入了国内外研究者的视野。Bartlet‘9’研究发 现35％的院内感染的肺炎与致病的厌氧菌有关。此后大量实验从感染的肺脏中分 离出与牙周破坏有关的厌氧菌，从而证实了他的观点。1990年Slots[101从难治性牙 周炎患者口腔分离出绿脓假单胞菌。国内学者何礼贤…1通过分子生物学技术证实 了获得性肺炎的病原菌与口咽部细菌有高度的同源性。上述研究都表明了牙周细 菌与肺感染有着密切的关系。绿脓假单胞菌是一种很重要的条件性的细菌性病原 体，它可以造成肺部组织和其它全身系统的易感宿主细胞的感染。绿脓假单胞菌 的感染可以通过对上皮细胞的粘膜黏附和侵入得以实现。宿主细胞防御的失败以 至不能清除粘膜表面的绿脓假单胞菌，造成绿脓假单胞菌在局部的增殖，有时将 伴随着明显的感染和组织细胞的大量破坏。本研究通过建立口腔细菌侵入和感染 肺上皮细胞的体外模型，研究口腔细菌在绿脓假单胞菌侵入肺上皮细胞时的调节 nucleatum，Fn)、伴放线菌聚集菌 gingivalis，Pg)、具核梭杆菌(Fusobacterium (Aggregatibacter 上皮细胞细菌的数量。然而，不属于牙周可疑致病菌的口腔内源共生细菌如内氏 放线菌(Actinomyces gordonii，Sg) 显示在绿脓假单胞菌侵入肺上皮细胞时没有明显促进感染的作用。当绿脓假单胞 菌和口腔细菌同时侵入与绿脓假单胞菌单独侵入肺上皮细胞相比，前者将刺激肺 上皮细胞产生更多的炎症细胞因子。在口腔的感染细菌中，牙龈卟啉单胞菌为慢 性牙周炎的主要致病菌，在本研究中牙龈卟啉单胞菌与绿脓假单胞菌共同作用于 Survivin抑凋亡蛋白。当牙龈卟啉单胞菌细菌的浓度达到一定量的时候，促进凋亡 蛋白和抑制凋亡蛋白，在不同时间点的mRNA水平发生改变，以此推断出牙龈卟 啉单胞菌在短时间黏附、内化于肺上皮细胞，并在细胞内增殖，与绿脓假单胞菌 共同作用更进一步的促进肺上皮细胞的凋亡，进而导致肺部组织炎症破坏加重。 本研究的目的是研究当口腔细菌与绿脓假单胞菌共同作用于肺上皮细胞，细 菌侵入宿主细胞数量的变化，诱导宿主细胞凋亡的程度，阐明这种反应的凋亡通 路及其细胞所释放的细胞因子在反应过程中的动态变化，探讨牙周致病菌在导致 肺部感染中的协同作用和作用机制。 方 法 一、研究对象 BAA．47 呼吸道细菌：绿脓假单胞菌(Pseudomonas Pa，ATCC aeruginnosa PA01模式株。) 口腔细菌： ①牙龈卟啉单胞菌(PorphyromonasgingivalisPg，381模式株) nucleatumFn， ATCC ②具核梭杆菌(Fusobacterium 25586模式株) Aa，ATCC43717 ⑨伴放线菌聚集菌(Aggregatibacteractinomycetemcomitans 模式株) naeslundii An，PK606模式株) ④内氏放线菌(Actinomyces ⑤格氏链球菌(StreptococcusgordoniiSg， ChalisCH1模式株) 呼吸