小麦蓝矮植原体染色体DNA的分离.PDF

微生物学通报 Apr. 20, 2013, 40(4): 706−710 Microbiology China © 2013 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 生物实验室 小麦蓝矮植原体染色体DNA 的分离 陈旺 李艳 吴云锋* (旱区作物逆境生物学国家重点实验室 农业部西北黄土高原作物有害生物综合治理 重点实验室 西北农林科技大学 植保学院 陕西 杨凌 712100) 摘 要: 【目的】分离小麦蓝矮(WBD)植原体染色体 DNA, 并建立 WBD 植原体染色体 分离纯化体系。【方法】采用差速离心和脉冲电泳(PFGE)方法富集纯化WBD 植原体染色 体DNA, 并通过PCR 和Southern blot 进行检测验证, 实时荧光定量PCR 方法对分离纯化 效果进行定量检测。【结果】脉冲电泳凝胶中出现一条大小约为 650 kb 的条带, 经 PCR 检测和 Southern blot 分析表明该条带为WBD 植原体的染色体DNA 。实时荧光定量PCR 检测结果表明采用差速离心与脉冲电泳结合的方法可以将 WBD 植原体基因组的相对拷 贝数提高436.5 倍。【结论】采用差速离心与脉冲电泳法结合可以有效地从感染 WBD 长 春花中分离到纯的WBD 植原体染色体DNA, WBD 植原体染色体DNA 大小约为650 kb 。 关键词: 小麦蓝矮(WBD)植原体, 染色体DNA, 分离纯化, 差速离心, 脉冲电泳 Isolation of chromosome DNA of wheat blue dwarf phytoplasma * CHEN Wang LI Yan WU Yun-Feng (State Key Laboratory of Crop Stress Biology for Arid Areas/Key Laboratory of Crop Pest Integrated Pest Management on Crop in Northwestern Loess Plateau, Ministry of Agriculture , College of Plant Protection, Northwest AF University , Yangling, Shaanxi 712100, China) Abstract: [Objective] Isolating chromosome DNA of wheat blue dwarf (WBD) phytoplasma and establishing an effective protocol of purification for chromosome DNA. [Methods] Dif- 基金项目：国家自然科学基金项目(No.; 高等学校学科创新引智计划项目(No. B07049) *通讯作者：Tel/Fax: 86-29 : wuyf@ 收稿日期：2012-06-17; 接受日期：2012-10-12 陈旺等: 小麦蓝矮植原体染色体 DNA 的分离 707 ferential centrifugation and plus-filed gel electrophoresis (PFGE) were used