小鼠 17β-hsd10 的克隆、表达及双抗夹心 ELISA 方法.PDF

生 物 工 程 学 报 刘传志 等/小鼠 17β-hsd10 的克隆、表达及双抗夹心ELISA 方法的建立 1775 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn November 25, 2014, 30 (11) : 1775−1781 DOI: 10.13345/j.cjb.140061 ©2014 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 小鼠17β-hsd10 的克隆、表达及双抗夹心ELISA 方法 的建立 刘传志，牛莹莹，陈元安，武成，于源华 130022 刘传志, 牛莹莹, 陈元安, 等. 小鼠17β-hsd10 的克隆、表达及双抗夹心ELISA 方法的建立. 生物工程学报，2014, 30(11): 1775–1781. Liu CZ, Niu YY, Chen YA, et al. Molecular cloning, prokaryotic expression and double-antibody sandwich ELISA development of 17β-hsd10 in mouse. Chin J Biotech, 2014, 30(11): 1775–1781. 摘 要: 原核表达小鼠 17β-羟基类固醇脱氢酶（17β-hsd10 ），制备抗 17β-hsd10 多克隆抗体，建立 17β-hsd10 双抗夹心酶联免疫检测方法 (Enzyme linked immunosorbent assay ，ELISA) 。采用RT-PCR 技术克隆得到小鼠肝 脏17β-hsd 10 基因，构建原核表达体系pET15b- 17β-hsd10/ Escherichia coli BL21(DE3) ，IPTG 诱导重组蛋白表 达，并优化表达条件；目的蛋白用 His 融合蛋白纯化柱（His-Binding-resin ）纯化并免疫BALB/c 小鼠和新西 兰大耳白兔，免疫血清总 IgG 采用硫酸铵沉淀法纯化，用获得的高效价鼠源和兔源两种多克隆抗体，建立 17β-hsd10 双抗夹心酶联免疫检测方法。表达蛋白约为29.5 kDa ，纯化后浓度为1.5 mg/mL，鼠源和兔源多克 4 4 隆抗体效价分别为 1.25×10 和2.5×10 ，建立的检测方法对于多种羟基类固醇脱氢酶无交叉反应，特异性良好， 可检出含量约为0.05 −0.1 µg/mL 的阳性血清。建立的17β-hsd10 双抗夹心ELISA 方法，简便、快速、敏感， 适合实验室研究科研广泛应用。并可能为检测阿尔茨海默病提供新思路和方法。 : 17β-羟基类固醇脱氢酶 10，双抗夹心酶联免疫方法，多克隆抗体 Received: January 26, 2014; Accepted: July 25, 2014 Supported by: Key Project in the Science and Technology Development Program of Jilin (No.. Corresponding author: Yuanhua Yu. Tel/Fax: +86-431 E-mail: yuyuanhua8888@126.com No. 1776 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech November 25, 2014 Vol.30 No.11 Molecular cloning, prokaryotic expression and double-antibody sandwich ELISA development of 17β-hsd10 in mouse Chuanzhi Liu, Yingyin