构建一种检测水中As3+的敏感型大肠杆菌.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 王伍 等/构建一种检测水中As3+ 的敏感型大肠杆菌 1081 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn August 25, 2016, 32(8): 1081−1092 DOI: 10.13345/j.cjb.160041 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved 环境生物技术 As3+ * * 王伍 ，纪松军 ，黄招竹，卢彬彬，吕建新 325000 , , , . As3+. , 2016, 32(8): 1081–1092. Wang W, Ji SJ, Huang ZZ, et al. Construction of an Escherichia coli strain for sensitive detection of arsenite ion in water. Chin J Biotech, 2016, 32(8): 1081–1092. 摘 要: 为构建一种敏感性强、特异性好的检测砷离子的大肠杆菌荧光报告菌株，本研究利用基因敲除技术， 敲除了大肠杆菌中负责向胞外转运砷离子的arsB 基因，构建对As3+敏感的菌株；利用egfp 基因作为报告基因， 构建融合检测载体pET28b-Pars-arsR-egfp 。然后将检测载体pET28b-Pars-arsR-egfp 转化至arsB 基因敲除菌中 完成敏感型 As3+ 检测菌株的构建。接着对此微生物传感器进行了检测条件的优化，以及线性检测范围、最低 检出限、特异性等性能的确定。研究结果表明，与利用野生大肠杆菌作为检测宿主相比，此敏感型砷检测菌株 对检测As3+ 的灵敏度有显著提高，最适检测As3+ 浓度范围为0.013−42.71 μmol/L ，最低检出下限为5.13 nmol/L。 因此，本研究利用基因敲除技术对大肠杆菌进行改造，成功地提高了砷检测微生物传感器的灵敏度，为重金属 微生物传感器的优化研究工作提供了有用方案。 : As3+检测，大肠杆菌，arsB 基因，基因敲除，敏感性 Construction of an Escherichia coli strain for sensitive detection of arsenite ion in water * * Wu Wang , Songjun Ji , Zhaozhu Huang, Binbin Lu, and Jianxin Lü Zhejiang Provincial Key Laboratory for Technology and Application of Model Organisms, School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University, Wenzhou 325000, Zhejiang, China Abstract: In order to construct an Escherichia coli strain with high sensitivity and specificity to detect arsenic ion using fluorescence as reporter, a sensitive strain to arsenic ion was obtained by knocking out the gene arsB that acts as an arsenic Received: January 7, 2016; Accepted: March 24, 2016 Supported by: National High Te