试验二薄层色谱应用.PPT

实验二 薄层色谱应用 实验目的 实验内容 思考题 实验目的 掌握薄层色谱的点样、展开及显色检识的操作方法 了解薄层色谱在鉴别各类天然产物中的应用 了解在薄层上进行原位化学反应的方法 实验内容 （一）定性点滴反应 1．样品 （1）薄荷油 （4）甘草次酸乙醇液 （2）苦参碱乙醇液 （5）原儿茶酸乙醇液 （3）芦丁甲醇溶液 2．检出试剂 （1）三氯化铁1%乙醇溶液 （2）三氯化铝1%乙醇溶液 （3）醋酐-浓硫酸试液 （4）碘化铋钾试液 （5）香草醛-硫酸试液 （二）鉴别中草药中的化学成分 1. 丹参中丹参酮ⅡA的检识 （1）硅胶CMC-Na 薄层板 （2）样品: ① 丹参乙醚提取物 ② 丹参酮ⅡA 对照品 （3）展开剂 : ① 苯 ② 乙酸乙酯 ③ 苯-乙酸乙酯（19:1） 由展层结果判断选用何种展开剂为最合适？ 2. 苦参中氧化苦参碱的检识 （1）2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板 （2）样品: ①苦参中提取的总生物碱 ② 氧化苦参碱 （3）展开剂: 氯仿- 甲醇- 浓氨试液 (5:0.6:0.3) 10℃以下放置 的下层液 （4）显色剂 碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液 记录实验结果. （三）薄层色谱上原位化学反应 将样品滴加在薄层板上，然后滴上适当的溶剂展开反应物。或先在试管内进行反应，而后在薄层板上进行层析检识。根据原化合物的Rf值再联系反应产物的层析行为，Rf值，可供鉴别一个化合物或者提供鉴定一个化合物或提供鉴定一个化合物极有价值的线索。如氧化、还原、脱水、水解、卤代、酶的催化作用、酯化、硝化、衍生物的制备、混合反应等均可在薄层板上进行 1．酯化反应 （1）取原儿茶酸乙醇溶液，在一薄层上点加两个相同样 点，其中一份样点的原点上，再点加试剂：醋酐—吡 啶（3:1），待溶剂挥散后，再重复点加试几次，干 后，以氯仿—丙酮（8:2）展层 为什么二者Rf值不同？ （2）取原儿茶醛乙醇溶液，在同一薄层上点加两个相同样 点，其中一份样点的原点上，再加醋酐一吡啶 （3:1），待试剂挥散后，再重复点加试剂数次，用 氯仿-丙酮（8:2）展层 用2、4二硝基苯肼显色。加酰化剂前后样品点有什么变化？ 2．成盐反应 取原儿茶酸乙醇溶液，在同一薄层板的起始线上点加两个相同样点。其中一份样在点样的原点上 ，再点加10%碳酸氢钠溶液（另一份不加），以氯仿一丙酮一甲醇（8:2:1）展层，并用三氯化铁乙醇溶液喷雾显色 可见其中点加碳酸氢钠的样点Rf值已有变化，未加碱的样点照常展开。为什么？ 3．苯腙反应 取原儿茶醛乙醇溶液，在同一薄层上点加两个相同样点，其中一份样点的原点上，再点加2，4一二硝基苯肼试剂，给以热风以促进成踪反应，然后以氯仿一丙酮（8:2）展层，可见出现两个棕红色斑点在红棕色斑点下，再喷以三氯化铁试剂，又出现紫兰色斑点 由原位反应的结果判断原来化合物的结果上有何基团特征？并绘出薄层层析图谱 * * * * 3．试验方法 取硅胶CMC-Na薄层板1~2块，用软铅笔按下图划线，将各样品先滴加于相应的格子中，再将各剂分别自空白起逐格点加试剂，观察并记录反应变化 （4） （3） （2） （1） （7） （6） （5） （4） （3） （2） （1） 试剂 样品