CFL相互作用蛋白的鉴定和其在斑马鱼心脏发育中的初步功能研究.pdfVIP

密级 学校代码 !Q5垒2 学号 2Q!!Q21垒丝卫 CFL相互作用蛋白的鉴定及其在斑马鱼心 脏发育中的初步功能研究 Identificationofthe Proteinsof Interacting CFLand ofitsfunctioninZebrafish Analysis Heart Development 研 究 生姓名 至睑睑 指导教师姓名、职称 互丞查副熬拯吴蠹出熬拯 学 科 专 业 童堡堂 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一四年五月 1IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII Il 7 Y254831 摘 要 心脏是人体的重要器官，心脏发育相关基因正常发挥其功能是心 脏发育的关键。探究心脏发育相关基因的功能，能够为了解先天性心 脏病的发病机制和干预性治疗提供基础。 斑马鱼CFL基因是从斑马鱼胚胎的eDNA文库中克隆出来的一 个心脏发育候选基因，可能在斑马鱼心脏发育过程中起重要作用。为 研究该基因的功能，本文对CFL基因进行了生物信息学分析、制备 了CFL蛋白的多克隆抗体、研究了斑马鱼胚胎发育过程中CFL基因 作用。 生物信息学分析表明：CFL基因编码278个氨基酸，含有一个 ZF—CXXC结构域。通过RT-PCR获得了CFLeDNA，表达、纯化了 CFL蛋白并且制各了针对CFL的特异性多克隆抗体。胚胎原位杂交 表明，CFL 果表明，CFL在斑马鱼胚胎发育的过程中在胚胎期至36hpf期间表达 呈现上升趋势，并且在24hpf时表达最强，36hpf后表达有所下调。 在成年斑马鱼的心脏、肌肉、卵、眼睛、脊索、鳍和鳃部位均有表达。 胚胎抗体染色结果显示，在斑马鱼胚胎发育24hpf时，CFL蛋白 的表达范围较广，并且在脊索中表达量较高，在心脏中CFL主要在 心室区域表达。 本研究室前期研究结果显示CFL基因受到RA信号的调控。为 进一步研究CFL对斑马鱼心脏发育的调控机制，本文利用RA的抑 制剂DEAB处理了斑马鱼之后，在24hpf时期进行了胚胎原位杂交实 表达的上调。运用免疫共沉淀技术分析RA处理的胚胎中CFL蛋白 的表达情况，结果显示CFL表达有所上调。因此，RA促进CFL蛋 白的表达。CO．IP实验结果显示，CFL蛋白与WNT通路重要成员 路之间的联系分子。 综上所述，CFL可能通过与DVL2的相互作用而联系RA信号与 Wnt通路，进而在斑马鱼心脏发育过程中起到重要的作用。 关键词：心脏发育；斑马鱼；western．blot；相互作用 ABSTRACT Heartisan ofhuman．Thenormalfunctionofheart organ important iscriticalforthe ofheart．To the developmentalgenes developmentstudy functionheart will a basefor of dev