地黄基因RgVP、RghKAT、RglKAT与RghBNG的克隆及表达.pdfVIP

CLoNINGANDEXPRESSIONSOF REHMANNIAGLUTINOSAGENES RgVP， TAND RghKA兀RglKARghBNG ADissertation Submittedto theGraduateSchoolofHenanNormal University inPartialFulfillmentofthe Requirements forthe ofMasterofScience Degree By ua ZhangYongh Supervisor：Prof．Zhou Yanqing 3 May，201 摘要 在植物中已经发现一些与植物器官膨大和生物量增加有关的功能基因，即增产基 involvedin size，ARGOS) 因，如生长素调节的器官大小基因(Auxin-regulatedgene organ vacuolar 和拟南芥液泡质子泵焦磷酸水解酶(ArabidopsisH+-pyrophosphatasegene， 彳即)。我们根据NCBI 守区，利用CLUSTAL 技术克隆怀地黄功能基因，并对其进行生物信息学、实时定量PCR和原核表达分析。 目前已经克隆到4个功能基因：液泡质子泵焦磷酸水解酶基因船冲、3．酮酯酰CoA．硫 原核表达重组载体，获得经PAGE考马斯亮蓝染色方法鉴定的IPTG诱导表达蛋白产物。 主要结果如下： 知植物的液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因同源性高达83％至86％，是一个地黄增产基 bp， 包含1395 bp的丌放阅读框，编码464个氨基酸，核苷酸序列与葡萄、番茄、毛果杨、 bp，包含1395 bp的丌放阅读框，编码464个氨基酸，核苷酸序列与葡萄、番茄、毛果杨、拟南芥的 的氨基酸序列与矮牵牛、葡萄、黄瓜、拟南芥和小麦的KAT氨基酸同源性分别为88％、 白为略碱性的稳定蛋白质，蛋白质二级结构主要由a．螺旋、不规则卷曲、p．折叠和p．转 角构成， 含了282bp的开放阅读框，编码93个氨基酸，核苷酸序列无同源序列，推导的氨基酸 I 序列与甜菜、野茶树、拟南芥、甘薯、欧洲栗、芜萍B12D蛋白的同源性分别为80％、 79％，各物种预测蛋白进化树符合物种进化规律，理化性质表明该蛋白为碱性的不稳定 蛋白质，蛋白质二级结构主要由Q．螺旋、不规则卷曲、D．折叠和D．转角构成，在N．端不 存在信号肽。 中表达量最高，盛花期花瓣中表达量最高，成熟期叶中表达量最高，不同发育时期，根 中表达量呈先升高再降低的趋势，茎中表达量呈递减趋势，到成熟期基本不表达，叶中 表达