乙型肝炎病毒DNA经精细胞垂直传播的实验探究.pdfVIP

、908937 中文摘要 乙型肝炎病毒DNA经精细胞垂直传播的实验研究 摘要 B 目的研究乙型肝炎病毒(hepatitis 性患者睾丸和附睾组织中的检出及组织细胞定位，观察体外培养的鼠精子细胞俘获 HBV DNA的能力及HBV DNA在精细胞中的定位，采用精子载体法建立HBVDNA垂直 传递的小鼠模型，探讨HBV垂直传播的机制。 HBeAg阴性者睾丸和附睾组织作为阴性对照，应用巢式聚合酶链反应(nest—PcR) 技术和荧光原位杂交(FISH)技术检测并定位睾丸和附睾组织中的HBvDNA；②体 外培养小鼠及大鼠精细胞，阳离子转染剂介导HBv DNA转染精细胞。应用聚合酶链 反应(PcR)技术检测鼠精细胞中船V DNA DNA的存在；制作精子涂片，FIsH观察船v 在精细胞中的定位；③采用精子载体法建立腿VDNA垂直传递小鼠模型，应用PcR 技术和半定量逆转录聚合酶链反应(RT_PcR)技术检测舶VDNA在新生代小鼠中的 表达情况。 结果①22例乙肝患者睾丸和附睾组织中，18例组织检出髓VDNA，阳性率为 81．8％，对照组未检测到HBVDNA，两组差别有高度统计学意义(P0．001)；荧光 原位杂交检测到HBV DNA主要集中在大部分乙肝患者睾丸组织生精小管的生精上皮 和基底部；②鼠精细胞原位杂交结果显示，荧光显微镜下精子样本中部分精子带有 黄绿色阳性杂交信号，普通光镜下DAB显色部分精子带有黄褐色阳性杂交信号，主 要在精子头部的中后部区域两侧和顶部，对照组无信号存在或只呈现本底水平染色。 在高倍镜下，随机选取视野，统计携带船vDNA的精子数目，荧光原位杂交显示阳 载体法获得31只新生代小鼠：儿只小鼠检出HBvDNA，检出率为35．4％(11／31)， RNA。 其中又有3只检出HBV 结论①乙肝患者睾丸和附睾组织中存在腿vDNA，定位于各级生精细胞内， 为HBV的垂直传播提供了形态学依据；③精子对鼬VDNA具有主动俘获性，可以携 带HBV DNA；③应用精子载体法建立HBv DNA经精细胞垂直传递的小鼠模型，一说明 }IBV DNA可经精细胞传递给下一代新生小鼠，并在新生代小鼠中表达复制。 硕士学位研究生 高慧婕 硕士生导师 王培林教授 王修海副教授 英文摘要 oN ANEXPERIMEN’I：ALSTUDYVERTICALTRANSMISSl0N oFHEPf鲴【1TISBVIRUSDNABYSPEItM ABSTRACT Todetect B intestisand ofhuman Objective hepatitisvirus(HBV)DNA epididymis with and the of to HBV positiveHBsAgHBeAg，observecapacitysperm