顶头孢霉双向启动子区域的克隆与应用.PDFVIP

卷 期 !! 微 生 物 学 报 $% ’!! ,% ’ 年 月 ##! ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ()*+ ##! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 顶头孢霉. ) !#. ) $ 双向启动子区域的克隆与应用 张丕燕 朱春宝 朱宝泉 （上海医药工业研究院 上海 ###!# ） 摘 要：用GHI 方法从丝状真菌顶头孢霉中克隆出全长0J/K? 的!#(L3!# H 双向启动子M,( 片段，通过转化子对 博莱霉素的抗性证明了该启动子在顶头孢霉中的双向启动功能。另外，利用所克隆的!#(L3!# H 双向启动子构建 了一个用于顶头孢霉转化的质粒)NO0/，并成功地将该质粒转化入顶头孢霉。)NO0/ 含有博莱霉素抗性基因和透 明颤菌血红蛋白基因（ ）， 杂交和 结合实验分析显示 整合到顶头孢霉的基因组 中并表达了 $%# P%=F2*B HQ $%# M,( 有活性的透明颤菌血红蛋白。 关键词：顶头孢霉， 双向启动子区域，转化 !#(L3!# H 中图分类号： 文献标识码： 文章编号 （ ） R5// ( ###03.#5 ##! #3#SS3#/ 均购自大连 公司； 聚合酶购自华美公司； 顶头孢霉是工业上用于发酵生产头孢菌素 的重要丝 17[7I7 748 M,( H 印迹试剂盒（ 状真菌，过去的/# 年来，诱变技术、生化筛选技术和原生质 P%=F2*B M]O Z+D G*+:2 M,( T7?2+BD 7BU M2F23 ）购自 公司； 酶为 产品； 体融合技术的应用使得头孢菌素的产量有了大幅度的提高。 F+%B PF7*F2* [+F $ I%2 TEA+BD P+D:7 在 内酰胺产生菌产黄青霉（ ）、构巢 G9O.### 购自中国医药集团上海化学试剂公司；博莱霉素由 3 ’())**)+, -./01%’(+, ! 曲霉（ ）和顶头孢霉（ 日本传染病研究所M* ’ Z%FF7 惠赠。 20!’.%)**+0 ()3+*4(0 5’!-4*10!1.)+, 4.’,16 ）中，基因 和 分别编码 （ 氨基己二酰） %( )*! 操作 ()+, !#(L !# H 3 T3 3 3