万年青的体细胞胚胎直接发生与植株再生堡.pdfVIP

1994年 5月 四川师范大学学报 (自然科学版) V0I．17．No．3 第 l7卷 第 3期 ]ourrmlofSichusuN0Ⅲ a1Un~w rsRy(NsturslS enee) M ay，1994 虎眼万年青的体细胞胚胎直接发生与植株再生 堡 茎L 四llI师范大学生物系 成都 S10066) [；2 ,2／8-2 鲍 晓 明 何 孟 元 (东北师范大学遗传与细胞研究所 长春 130024) 摘要 本文结果表 明，在含NAA和 BA 各0． lg／l的MS培养基 上，体细胞胚以高 鞭率直接发生于虎眼万年青休眠子鳞茎鳞片切段的近轴面原形态学基部一侧．体细胞甄 在残余的半干旱培养基上失承娃理后萌发率显著提高，并产生根景完整的健壮再生植 株． ’ 黻 燃 衄 幅 生 受 ， O 引言 植物体细胞胚与通过器官发生途径诱导的芽相比，具有个体间遗传背境更为一致、发生量大、 结构完整等优点0御，在无性系侠繁和植物遗传工程等方面的应用价值已受到高度重视0 ．然而， 迄今为止还有很多有用植物的体细胞胚胎发生能力和诱导条件有待查 明．至于如何提高体细胞胚 萌发并产生再生植株的频率．也是一个受到广泛关注的问题n一目． 观赏植物虎眼万年青 (OrnithogaluancaudatumAk．)是百合科的一种多年生常绿植物 ．通常 以产生子鳞茎方式行无性繁殖，繁殖系数低．该植物的组织培养 已有报道 “]，但繁殖率仍鞍低．本文 报道了从鳞片外植体诱导体细胞胚高频率直接发生的条件控制 ．以及促进体细胞胚正常萌发和提 高再生植株产生频率的改进方法． 1 材料与方法 1．1 材料的准备 从三株盆栽的虎眼万年青母株上收集已发育成熟甚至巳自然脱落的子鳞茎贮于 4℃冰箱备 用．取直径为 6—8mm的子鳞茎经 95 乙醇提 5分钟 ，无菌水漂洗 3次后用 0．1 升汞表面灭菌 15分钟 ，再经无菌水漂洗 5敬后剥去最外层鳞茎被膜，然后横切成 1、5ram厚的圆片．将圆片上各 层鳞片切段剥取下来，分别以正向(即原形态学基 一铡与培养基接触)和倒置两种方式接种于诱 导培养基上． ． 1．2 培井索件 诱导培养基为附加了 一萘乙酸 (NAA)和 6一苄基瞟呤(BA)各0．5mg／l以及酪朊水解物 (cH) 500mgtl的Ms培养基．用于体细胞胚萌发的培养基为羌激素和cH的告Ms培养基．培养基pH 调到 5．8后甩 6．5sll琼脂固化，在 12t℃下热压灭菌 20分钟．材料在 白天 26E、18001ux光照 l4 小时 、夜间 10小时 20C不照光的条件下培养． 1．3 组织切片 Il堑蔫 日觏 1993—01—02 四川师范大学学报 (自然科学版) 17卷 分期取样用 FAA固定液 固定 24小时，按常规方法经脱水、透 明和石蜡包埋后切成 l0 厚的 切片，番红染色、固绿对染．封片后光镜观察． 1．{ 扫描电麓琨察 样品用 2．5 戊二醛固定 4小时，3 高锰酸钾在 4℃下后 固定 12小时．以后按常规操作，只是 在脱水前和脱水至 50 乙醇时，分别用碘化钾水溶液和醋酸双氧铀溶藏各处理 30分种作 电子染 色 以取代喷金一步．样品用 JSH一840扫描 电镜在 15kV下观察． 1．5 植株再生 待大量体细胞胚形成后，一都份立即从母体组织上剥离下来 ，直接或经失水处理后才进入萌发 试验 ．另一部份经失水处理后才剥离下来 ，让其萌发．失水处理方法 ，一是将材料置于残存的半失水 干旱培养基上 3至4周，相对湿度不低予80 ，光温条件与诱导期相同．二是将材料放在垫有湿润 滤纸的无菌