融和蛋白GSTSUMOMT在大肠杆菌中的表达、.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（１２）：１１～１６ 融和蛋白ＧＳＴＳＵＭＯＭＴ在大肠杆菌中的表达、 纯化及其活性研究 １，２ １ １ １ ３ １ 黄亚东 　苏　烨 　丁长才 　张敏静 　李校 　苏志坚 （１暨南大学生命与健康工程研究院　广州　５１０６３２　２基因工程国家工程研究中心　广州　５１０６３２） （３吉林农业大学教育部生物反应器与药物开发工程研究中心　长春　１３０１１８） 摘要　将编码融合蛋白ＧＳＴＳＵＭＯＭＴ的ＤＮＡ片段连接到大肠杆菌表达载体ｐＥＴ２８ａ中，构建重组 ? ? ? 表达质粒ｐＥＴＧＳＭＴ并转化到大肠杆菌Ｏｒｉｇａｍｉ（ＤＥ３）中。２０℃，１ｍｍｏｌ／Ｌ的ＩＰＴＧ诱导２０ｈ后，获 ? ? 得分子量约为４３ｋＤａ的融合蛋白，表达量占菌体上清总蛋白的３８．４％。利用谷胱甘肽交联琼脂糖 （ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ）凝胶柱和ＳｅｐｈａｒｄｅｘＧ２５分子筛联用可以得到纯度为９５％以上的融合蛋 ? 白，得率约为７０ｍｇ／Ｌ。该融合蛋白可与ＧＳＴ抗体产生阳性反应。融合蛋白ＧＳＴＳＵＭＯＭＴ可以显 ? ? ２＋ ２＋ ２＋ 著提高宿主对Ｃｄ 、Ｚｎ 和Ｃｕ 离子聚积的能力，其耐受能力比对照组分别提高４．２倍、４倍及１．６ ２＋ 倍。此外，原子吸收光谱法测定，每分子ＧＳＴＳＵＭＯＭＴ可以结合２～３个Ｃｄ 离子。 ? ? 关键词　金属硫蛋白　融合蛋白　表达　纯化　结合重金属离子 中图分类号　Ｑ８１９ 　　金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）是一类广泛存在 产蛋白质的优选宿主细胞生产 ＭＴ的方法亦文献报 ［６～９］ 于动物、植物以及微生物中富含半胱氨酸的蛋白质，具 导 。尽管大肠杆菌表达系统具有表达量高、易于培 ［１］ 养和操作以及生产成本低等优点，但是，使用该表达系 有非常保守的一级结构和相似的空间结构 。ＭＴ在 哺乳动物中存在４种亚型，即ＭＴＩ、ＭＴＩＩ、ＭＴＩＩＩ和ＭＴ 统仍难以直接获得大量可溶性的ＭＴ，其原因在于ＭＴ ? ? ? ＩＶ。其中，ＭＴＩ和ＭＴＩＩ存在于所有器官中，而ＭＴＩＩＩ 分子量小，且含有２０个半胱氨酸，极容易形成“包涵 ? ? ? ? ［２］ 体”，即无生物学活性的不溶性聚合体。此外，即使获 存在于脑组织中，ＭＴＩＶ则仅存于鳞状上皮组织中 。 ? 由于具有结合重金属离子、清除自由基、抗辐射以及调 得大量的包涵体，为了得到有生物学活性的蛋白，还必 须对包涵体进行变性 复性处理，这个过程往往损失大 节微量元素平衡等重要生理功能，且与动物机体的生 ? 长发育及部分疾病的发病机理有着密切的关系，因此， 量的蛋白。为了解决这一难题，人们又采用融合技术， ＭＴ一直是生物学与医学领域中基础研究和应用研究 将ＭＴ基因与具有协助蛋白质正确折叠的融合蛋白如 的热点之一，并被广泛应用于药物、