纯化与精制- 色谱技术.ppt

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纯化与精制- 色谱技术

1.2.4纯化与精制- 色谱技术 概述 吸附色谱 离子交换色谱 凝胶过滤 亲和色谱 第一节 色谱分离技术概述 1.色谱技术概念:色谱技术是一组相关分离方法的总称,色谱柱的一般结构含有固定相和流动相,根据物质在两相间的分配行为不同,经过多次分配(吸附-解吸-吸附-解吸…),达到分离的目的。 2.特点: (1) 纯化倍数高 (2) 操作规模小,放大困难 (3)?终产品纯化 (4) 适用于价格昂贵的产品 4.色谱的分类 (1)根据溶质分子与固定相相互作用的机理不同的分类 (2)根据固定相的形状不同的分类: (3)根据流动相的物态不同的分类 : 5.色谱分离的基本原理 5.1色谱分离的基本原理 (1)分配系数:溶质在固定相与流动相浓度比值 可由Langmuir方程得出 Kd---分配系数 q、c---溶质在固相和液相中的浓度 (2)阻滞因子Rf 定义:阻滞因子是在色谱系统中溶质的移动速度和标准物(与固定相没有亲和力的流动相 Kd=0)的迁移率之比 意义:在于体现某一种溶质与固定相之间的亲和力大小 5.2色谱图及基本概念 (1)色谱图:混合液中各组分经色谱柱分离后,随流动相依次流出色谱柱进入监测器,监测器的响应信号-时间(或流动相体积)曲线,称为色谱图或色谱流出曲线。 (2)基线:在操作条件下,色谱柱出口没有组分流出,仅有流动相流过监测器,此时流出的曲线。 (3)色谱峰:当样品中的组分随流动相流入监测器时,监测器的响应信号随时间变化所形成的峰形图形。 (4)峰形:对称于峰尖的正态分布曲线。 (5)洗脱体积 色谱柱中,使溶质从柱中流出所需流动相体积,为洗脱体积 不同的溶质,由于和固定相的亲和力的不同,洗脱体积也有所差异 (6)保留值 保留值:混合物中各组分在色谱柱中停留的时间或将组分带出色谱柱所需流动相体积的数值 保留时间(tR):从开始进样至出口处被测组分出现浓度最大值所需要的时间。 死时间(t0):不被固定相滞留的组分(空气等),从开始进样至出口处被测组分出现浓度最大值所需要的时间。 校正保留时间(tR’) :扣除死时间后的保留时间。 (tR’= tR- t0) 保留体积(VR) 、死体积(V0) 、校正保留体积(VR’) 相对保留值(r2,1): 在相同操作条件下,待测组分与参比组分的校正保留值之比。 (7)分离度:相邻两色谱峰保留值之差与两组色谱峰峰底宽度平均值之比。 (8)色谱柱的理论塔板:流动相与固定相平均浓度达传质平衡时的一段柱高(塔板高度) 反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系 理论塔板数的计算方法: N---理论塔板数 tR---保留时间 W1/2---半峰宽 Wb---峰底宽度 理论塔板高度:H L---柱长 6.色谱分离操作 第二节 吸附色谱法 1. 基本概述: 1.1吸附定义:吸附是利用吸附剂对液体或气体中某一组分具有选择性吸附的能力,使其富集在吸附剂表面的过程。 (表面吸附与吸收) 1.2吸附作用: 脱色、除臭、吸湿、防潮、及某些产品(如:酶、蛋白质、核苷酸、氨基酸、抗生素等)的分离精制。 1.4分类:柱色谱和薄层色谱 1.5分配系数(K)与迁移率(Rf)关系 K大,Rf小;K小,Rf大 1.6方式:静态吸附与动态吸附 2 吸附过程的理论基础 2.1基本概念 吸附: 利用吸附剂对液体或气体中某些组分具有选择性 吸附能力,使其富集在吸附剂表面的过程。 吸附物:被吸附的物质。 吸附剂:吸附操作所使用的固体原料。一般为多孔微粒或 多孔膜,具有很大比表面积。 原因:固体内部分子作用力=0 固体分子外部作用力≠0,即从外界吸附分子、离子原子,并在吸附表面形成单分子或多分子层。 c.同系物:分子量越大,极性越低,易被非极性吸附剂吸附 如:活性炭:W大>W小; 多肽>氨基酸;多糖>单 糖 (3)其他因素:T、pH、吸附质浓度、吸附剂用量等 (2)活性炭对物质的吸附一般规律 a.吸附作用:在水中吸附力最强,在有机溶剂中吸附力最弱 b.洗脱作用:水的洗脱能力最弱,有机溶剂洗脱能力最强 c.被分离物类型 :W大>W小; 芳香族>脂肪族 d. pH 值的影响 2.4.3大孔性吸附树脂 (1)大孔性树脂的结构 大孔吸附树脂是一种不含交换基团的, 具有大孔结构的高分子吸附剂。通常大孔性树脂是聚苯乙烯和二乙烯苯的共聚物,它们具有多孔性的巨大网状结构。 (2)大孔网状吸附树脂的种类 非极性吸附树脂:苯乙烯交联而成,又称芳香族吸附剂。

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