光学显微镜观察较厚样品不再是难题.PDFVIP

生生命命奥奥秘秘wwwwww..lliiffeeoommiiccss..ccoomm 结构基因组学是继人类基因组之后又一个国际性科学大热点，主要目的是试图在生物体的整体水平上 （如全基因组、全细胞或完整的生物体）测定出 （以实验为主、包括理论预测）全部蛋白质分子、蛋白质－ 蛋白质、蛋白质－核酸、蛋白质－多糖、蛋白质－蛋白质－核酸－多糖、蛋白质与其它生物分子复合体的精 细三维结构，以获得一幅完整的、能够在细胞中定位以及在各种生物学代谢途径、生理途径、信号传导途径 中全部蛋白质在原子水平的三维结构全息图。在此基础上，使人们有可能在基因组学、蛋白质组学、分子细 胞生物学以致生物体整体水平上理解生命的原理。同时，对疾病机理的阐明和疾病的防治也都有重要的应用 意义。 这一学科的起源可以追溯到二十世纪九十年代中后期加拿大、日本和美国等国出色的航天科学技术，而 后大量基因组信息的发现、蛋白质表达的研究、计算方法的建立、生物分子核磁共振和X射线结晶的发明， 使得结构基因组学发展成为一门独立的学科。 可以这样概括国际结构基因组计划的内容：选择目的基因、构建表达质粒、规模化地表达纯化蛋白质、 用X-射线晶体衍射、核磁共振波谱 （NMR）系统测定蛋白质的三维结构，特别是空间结构类型未知 （无序列 同源性）的蛋白质，进而对蛋白质分类，根据蛋白质的一级结构预测其空间结构、功能。 结构基因组学的研究，将成为基于蛋白质空间结构合理设计药物的基础，同时有助于开展结构生物学的 方法学研究。 八 光学显微镜观察较厚样品不再是难题 随着对较厚样品光学成像能力的增强，使用光 因此，在类似共聚焦显微镜 （c o n f o c a l 学成像技术来观察活体内的生物过程正逐渐成为可 microscopy ）这类高分辨率的成像技术和能进行活 能。 体观察但分辨率较低的成像技术 （如MRI）之间就 出现了一道分水岭。不过，最近几年间出现的几种 生物体都是三维结构的，即使活体状态下的细 新的光学成像技术有望消除这道鸿沟。 胞也很少会像它们在培养皿中那样呈现出单独的单 单层光显微技术 （light sheet microscopy ）这 层状态。不过，在进行活体研究时历来就存在技术 项最近获得改进的传统技术能对厚达数毫米的样品 困难，尤其是在活体成像技术方面更是没有什么突 进行观察，并能进行荧光成像。该技术已经成功用 破。 于观察细小生物体和胚胎组织。去年，有科研工作 生物组织大部分都是不透光的，而且对光的 者使用改进的单层光显微技术观察斑马鱼胚胎在24 散射能力特别强，因此，观察较厚组织时很难获得 小时内的发育状况，并获得了数千个细胞的整体图 质量较好的图像。例如，使用传统的共聚焦显微镜 像。 就无法观察厚度超过数百微米的样品，但果蝇幼虫 （f ruitf ly larva ）、哺乳动物的胚胎 （mammalian embryo ）或者组织切片等样品的厚度通常都要远 远超过这个范围。另一方面，研究人员也希望能获 得这些样品的整体图像，从而能对这些样品的组织 结构和基因表达情况有个整体了解，不过这些要求 对于传统的光学成像技术来说都难以达到。尽管现 在有了核磁共振成像技术 （magnet ic resonance Imaging ，MRI ），在观察的深度方面有了一定的 图片说明：鳉胚胎 （Medaka embryo ）的光学图像。 提高，但图像的分辨率还远远达不到要求。 图片来源：Nat. Methods 4, 3 11-3 13; 2007.