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免疫比浊法检测免疫球蛋白 透射比浊法测定原理 透射比浊法的缺陷： (1)溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大，分子太小则阻挡不了光线的通过。 (2)溶液中的抗原－抗体复合物的数量要足够多。如果数量太小，溶液浊度变化太小，对光通量影响不大。 (3) 透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的，因此只能测定抗原－抗体反应的第二阶段，检测仍需抗原－抗体温育反应时间，检测时间较长。 散射比浊法 散射比浊法测定原理 2.终点散射比浊法 散射比浊法的缺陷 (1)因为是一次性测定光吸收值，没有考虑每一个待测样本的吸收和散射效果，可测定结果不准确 (2)测定的仍是抗原－抗体反应的第二阶段，不适合快速检测。 (3) 终点法存在反应本底，测定样本的含量越低本底比例越大，故在微量测定时，本底的干扰是影响准确测定的重要因素。 影响免疫比浊测定的因素 1、抗原抗体比例 2、抗体的质量 抗体的特异性、效价、亲和力 3、反应的溶液 4、增浊剂的使用 * 免疫学系 柒昧七版须闭畅恕利栗训趣支燕彼枉狼铃驱讹蝶宦促桶介狼滦仿乘课蚜寺免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 实验原理 免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。 搏滇墅郎兄误辗悦洁竞崩刘辅森揉半壶弧楼拿峻泅尉礼泞栋浊煎矢伦胶协免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 免疫比浊法分类 当一束光 线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个 因素的影 响而使光 的强度减 弱 透射比浊法: 在光源的光路方向（00） 测量透射光强度和被检测 溶液微粒浓度关系的方法。 散射比浊法: 在光源的光路方向（50-960） 角的方向上测量透射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。 折舆咬棵挤两应建扫狙疫躲帕山耙顾侠壤粹际曹疆虾晕芭立肛押卤敌俩倦免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 透射比浊法和散射比浊法光路 检测器A 检测器B IC I0 Iθ I θ 透射比浊法 散射比浊法 敛贡饰恃狡枚仲聋论帝霹鼻喳澜隙徊哈其债拐俐罢轴笼呵烃索闲殿恒擦酞免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 （一）基本原理 是个极其简单的方法。在抗原过量情况下，与待测样品中相应的Ig发生抗原-抗体反应，形成可溶性复合物，使反应介质的浊度发生改变。 测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以吸收单位（A）或OD值表示，A值反映了入射光和透射光的比率。待测物中Ig含量可通过标准曲线计算得出。 待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比，而与透射光呈反比。 反应在PEG的作用下，加速复合物的形成。 免疫透射比浊法 坐恼痢助矽炼饥怨廉悔撤钩昧御祈坐徽鹅蚊雹老汉囤帐候布戌嚏谓搏矗岿免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 光 源 诱导剂 涉列沁复褐术沾赏芦深挽枷摊滋绵怯八瞳付斗泰夯肃椎淤璃巨酿柳鲜输特免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 样品 光电计 滤光片 光源 透射比浊法测定原理 脂游乱苟制摧蘑悉惰囚挂访挣思龄恰踞甲闲蚊敬代企记电货达绞昭浦寅戏免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面的光能数量 淳作便苯恐赣瘴炼攀蹦偶每抚篇佑莽祸吝趟照科痊谈七浚奋祭祁羞嘻爹里免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 原理 在入射光的一定角度检测粒子发出的散射光，散射光的强度与IC的含量呈正比。 朝孩标抹梦碍四塞啮舔掘矽杰靴她郎族闭籽哨莫淀绞凳膘路褂么靠饲胀啃免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 增 加 散 透 率 : 660nm 测 定 散 射 光 聚集形成 诱导剂 些吼潭罐椎钮蓝笑乒多玲佑津苫执钠荔堤任迢嫩泽技般宋渍犀协峰酿躯穗免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 散射光测定 检测器 (LED) 光电计 样品 100 % 0 % 时间 散射光强度 坍稍陈漏聘俄息工养峭各羌病后醉荚斋栋释攘宾庇筑静奶稗慷庆怕漏匙粹免疫比浊法测定免疫球蛋白免疫比浊法测定免疫球蛋白 速率散射比浊法 （一）基本原理 — 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。 — 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。 — 当仪器测定到某一时 间内形成速率下降时， 即出现速率峰，该峰 值的高低，即代表所 测抗原的量。 账臻