6实验六血型鉴定及血涂片制作.docVIP

《》教案 课程 班级 13级1、2班 学期 2014-2015-1 课时 学时 教师 上课日期 课程类型 实验名称 ABO血型鉴定 教学目的、要求 ABO血型鉴定ABO血型鉴定掌握血涂片的制备方法；认识红细胞及各种白细胞的典型形态；教学重点 教学难点 主要教具 设备材料 显微镜医用一次性采血针，双凹玻片，小试管，竹签，棉球，腊笔标准A血清，标准B血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片 、双凹片（推片） 。 Wright’s染液：Wright’s色素粉末0.1g，溶于60 ml甲醇。?? 思考题 1. 你鉴定的血型什么血型 2.你鉴定出来的血型可以给哪些血型的人输血，可以接受哪些血型的人献的血？还需注意些什么？在无标准血清情况下已如某人为A或B型，能否用其血去检查未知血型？如何作？红细胞凝固、凝集、聚集三者有何不同？ 课后记 教学内容 备注 ?【实验原理】 ? ? ? ? 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表1） 表1 ABO血型中的抗原和抗体 血 型 红细胞膜上所含的抗原 血清中所含的抗体 O 无A和B 抗A和抗B A A 抗B B B 抗A AB A和B 无抗A和抗B 【实验对象】 人体（学生自愿者）。 【实验器材和药品】 1．仪器 显微镜 2．器械 采血针，双凹玻片，小试管，竹签，棉球，腊笔。 3．药品 标准A血清，标准B血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。 玻片法 （1） 取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2） 细胞悬液制备 从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3） 用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。 （4） 竹签两头分别混合，搅匀。 （5） 10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （6） 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。（见图示） 图 玻片法鉴定ABO血型 . 试管法 （1）取试管2只，分别标明A，B字样，分别加入相应标准血清2滴，各管加入受试者的红细胞悬液1~2滴摇匀。 （2）将上述二试管用1000转/分离心1min。 （3）取出小试管，轻弹底部，如沉淀物呈团块状浮起为凝集，呈散在烟雾状上浮进而恢复原混悬状为无凝集。 图 血涂片推片方法 （3）染色 （4）观察 取一滴新鲜的血液，置于玻片的一端，以左手拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45角度，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。涂片在空气中干燥后置于染色架上，滴加染色液，使涂片被染色液覆盖，染一分后，再加等量的缓冲液于染色液上，浸染约5～8min。此时涂片表面呈现一层古铜色，用蒸馏水迅速冲洗，见涂片呈粉红色后，以吸水纸吸干。 ②观察 将干燥好的血涂片置显微镜下观察。 注意事项： ·涂血片后，及时晃动玻片，使血片迅速干燥即固定；空气中干燥时间过长细胞易变形，影响观察和测量。 ·推片时应保持一定的速度和两片间的角度，连续推进，不要中断，以免血片厚薄不一。 ·血片的厚薄，可由血滴大小、推片速度和两片间夹角的大小来调节。血滴小，推进速度慢，两片间夹角角度小，则血片薄；反之则厚。厚的血片适于做血细胞分类，容易找到白细胞。 实验过程主要由学生自己动手操作，教师随堂指导。