VX2兔移植性性直肠癌模型制作及其生物学特性观察.pdfVIP

·788· 肿瘤2006年8月第26卷第8期Tumor VXz兔移植性直肠癌模型制作及其生物学特性观察 汪谢丹1’2，张进祥1，尚丹1，郑启昌¨ (1．华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科，武汉430022；2．武汉科技大学医学院外科教研室，武汉430080) [关键词]直肠肿瘤；肿瘤移植 [中图分类号]R735．3[文献标识码]B[文章编号]1000—7431(2006)08—0788—02 在直肠癌的肿瘤生物学与治疗学研究中，各种实验模型 1．5．2直肠癌肿瘤模型解剖学和组织学观察实验制模后 起着重要的作用。目前使用较多的直肠癌动物模型，存在着 第14，21和28天时分别处死动物2只，进行详细的解剖学 诱导时间长，成功率不高的问题。本研究的VXz兔移植性 检查。肉眼观察移植瘤生长部位、直径、质地、活动度、播散 直肠癌动物模型能较好地解决这些问题。 范围、腹水多少及性状、脏器转移情况(包括肺、肝、脾、肾、网 膜和局部及远处淋巴结等)。移植肿瘤及主要脏器用10％ 1材料与方法 中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片，经苏木精一伊红染色，光 1．1 实验动物 日本长耳大白兔20只，体质量平均1．5镜观察。6只荷瘤动物观察荷瘤后寿命。 kg，均为雄性；由华中科技大学同济医学院实验动物中心提 2 结 果 供。在协和医院动物实验中心饲养。 1．2细胞株 2．1肿瘤生长情况制模型成功12只，成功率60％(12／ 兔VX。瘤细胞株购于日本京都Funabaashi 公司，由华中科技大学同济医学院协和医院普外科实验室保 20)。动物模型第10天，可在B超下观察到直肠壁上直径约 存。用含10％小牛血清的RPMI1640培养液进行常规培养 10mm的肿块，肿瘤边界清楚；14～21d肿瘤体积明显增 和传代。 大。解剖见肿瘤在直肠壁内呈圆形，结节状，无包膜。肿瘤 1．3肌内移植模型的建立及传代取冰冻VXz瘤细胞悬 结节呈灰白色，鱼肉样，质硬，其内可见丰富的供瘤血管。21 液，按一般细胞培养技术进行复苏后离心5min(800r／ d盆腔已有多处的转移，分别侵及膀胱、子宫并与盆壁固定， 肿瘤边界不清；肿瘤压迫膀胱下端导致尿潴留，膀胱极度扩 min)、。除去上清液，加入PBS液用玻璃棒搅匀，取悬液置于 RPMl1640培养液中，细胞培养传代，台盼蓝染色并作活细 张；股动脉压迫致下肢无力；另有肠梗阻、肠膨胀表现。解剖 胞计数，将培养液调制成106个／mL活细胞浓度。将复苏并模型未发现有盆腔以外的肿瘤转移。28d肿瘤中心开始腐 烂，35d左右动物死于衰竭。不同时期肿瘤生长率差别有显 调制为每毫升106个活细胞浓度的VXz冰冻肿瘤细胞悬液 0．5mL移植于兔后腿外侧肌肉。2周后可扪及实质性包 著性意义，14、21、28d肿瘤体积三组间两两比较差异均有显 块，即制成荷瘤种兔。传代移植可在兔的后腿外侧肌肉内施 著性差异(Po．05)，以第14～21天肿瘤生长最快。 行，方法是手术剥离荷瘤种兔后腿外侧肌肉内实体瘤块，取 2．2直肠癌模型组织学特征肿瘤组织活检并行HE染 瘤块边缘生长旺盛的鱼肉样组织，剔除筋膜和坏死组织，用 色。镜下可见浸润性癌巢，无明显边界，间质分界不清，结缔 眼科剪尽量剪碎，9号空针吸入后移植于健康兔后腿外侧肌 组织较少，癌巢边缘分布着被浸润的肠壁结构。肿瘤细胞弥 肉内，保种传代一般在移植3周左右进行1次。 散排列，可见纤维间隔，新生毛细血管丰富。高倍镜下见瘤 1．4 直肠癌模型的建立 剥取VX。荷瘤种兔瘤块，取边缘 细胞体积大，形态不规则，呈不规则排列；细胞质丰富，淡红 生长旺盛的粉红色鱼肉样组织用眼科剪剪成lmm3的移植 染色；核肥大，其大小及形态各异，染色深浅不均，核分裂象