第9章 色谱法基础的.ppt

第九章 色谱法基础;一、色谱法概述;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;（动画）; 色谱法是一种分离技术； 装CaCO3的玻璃柱叫色谱柱； 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在色谱柱中的两相间不断进行着的分配过程。;A.J. P. MARTIN 和R.L.M. Synge ;色谱法的发展历史;色谱法起过关键作用的诺贝尔奖研究工作;二、色谱法分类 ;2. 按固定相的固定方式分类;3. 按分离过程的机制分类;不足之处： 被分离组分的定性较为困难。;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.; 蛋白质中含有碳、氢、氧、氮、硫等元素。其中，氮元素极为特别：氮在绝大多数蛋白质中含量相当接近，一般为15％～17％，平均值为16％左右。因此，丹麦化学家约翰·凯达尔很巧妙地想到，既然氮元素含量稳定，只要准确测量出氮的含量，便能推算出其蛋白质含量。发表于1883年的此方法，无疑为蛋白质的检测做出了巨大贡献。而凯氏定氮法亦有不足之处。最大的问题在于这种方法只能检测氮含量，并不能鉴定蛋白质真伪。不难想象，只要加入含氮量高的物质，就可以骗过凯氏定氮法，轻松获得“高蛋白含量”的称号。; 三聚氰胺具有轻微的生物学毒性。早在1945年，美国纽约里德勒实验室两位毒理学专家便发表论文指出，长期给大鼠、兔和狗喂食大剂量三聚氰胺后，会造成其生殖、泌尿系统的损害，以及膀胱、肾部结石，并可以进一步诱发膀胱癌。 ;岛津 气相色谱仪;第九章 色谱法基础; 无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。 稳定的基线 基线噪声 基线漂移;3. 保留值;③调整保留时间（t’R）; 习惯上，t’R2＞ t’R1，故α ＞1，标志两峰在色谱图中的相对位置。相对保留值只与柱温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关，它表示了固定相对这两种组分的选择性。; 用来衡量色谱峰宽度的参数，有三种表示方法： （1）峰底宽(W)：色谱峰两边转折点所画切线与基线相交截距； （2）半峰宽(W1/2)：色谱峰高一半处的宽度 ； （3）标准偏差(?)：即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。; ;第九章 色谱法基础;一、分配系数和分配比;分配系数 K 的讨论;2.分配比 k;3. 容量因子与分配系数的关系 ;4. 容量因子与保留值的关系;;6. 分配系数K与保留值的关系;二、塔板理论 ;1. 塔板理论（plate theory）- 柱分离效能指标;塔板理论的假设： （1）在每一个小段内，平衡可以迅速达到； （2）将载气看作成脉动（间歇）过程； （3）试样沿色谱柱方向的扩散可忽略； （4）每次分配的分配系数相同。;塔板理论指出：;注意： 同一色谱柱对不同物质的柱效是不同的。因此说明柱效时除应注明色谱条件外，还应指出是用什么物质测量的。同理，比较不同柱子的柱效时，必须把操作条件固定下来，用同一种物质通过不同的色谱柱，从所得的色谱峰分别计算n有效，该值↑，柱效↑。;例：已知一根长1m的色谱柱的n有效为1600块，组分A在该柱上的调整保留时间为100s，试求A峰的半峰宽及有效塔板高度。;例：在2m长的色谱柱上，测得某组分保留时间为6.6min，峰底宽0.5min，死时间1.2min，载气体积流速为40mL·min-1，固定相体积为2.1mL，求：（1）分配比 k；（2）死体积 V0；（3）调整保留体积 V’R；（4）分配系数 K；（5）有效塔板数；（6）有效塔板高度（流动相体积即为死体积）。; 塔板理论的特点和不足; 减小A、B、C三项可提高柱效； 存在着最佳流速； A、B、C三项各与哪些因素有关？;1. 涡流扩散项 A（多径项）; (1) 存在着浓度差，产生纵向扩散; (2) 扩散导致色谱峰变宽，H↑(n↓)，分离变差; (3) 分子扩散项与流速有关，流速↓，滞留时间↑，扩散↑; (4) 扩散系数：Dg ∝(M载气)-1/2 ； M载气↑