基因与基因工程(xin)【PPT】概要.ppt

↓ （2） 原核蛋白质编码基因的结构 基因 转录区 启动子 终止子 转录 ATG TAA 5’-UTR 3’-UTR 转录终止位点 RNA起点 核糖体结合位点 （3）真核蛋白质编码基因的结构 基因 转录区 启动子 终止子 转录 ATG TAA 5’-UTR 3’-UTR 多聚核苷酸化位点 RNA起点 初级RNA转录本 剪辑 ATG TAA 5’-UTR 3’-UTR 多聚核苷酸化位点 RNA起点 核糖体结合位点 mRNA 基因 转录区 启动子 终止子 转录 ATG TAA 5’-UTR 3’-UTR 多聚核苷酸化位点 RNA起点 初级RNA转录本 剪辑 ATG TAA 5’-UTR 3’-UTR RNA起点 mRNA 外显子 内含子 二 . 基因工程原理 1. 基因工程诞生的基础 （1）基因工程诞生的理论基础 a. 在上世纪40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA 而不是蛋白质，从而明确了遗传的物质基础问题。 b. 在上一世纪50年代揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理， 从而解决了基因的自我复制和遗传传递的问题。 c. 在上世纪50年代末期和60年代初期，科学工作者相继提出了“中心法则”、 “操纵子学说”，并成功地破译了遗传密码，从而阐明了遗传信 息流向和表达的问题。 小结：基因工程诞生的理论基础是 （a） 基因的分子载体是DNA而不是蛋白质， 从而解决了遗传物质的基础问题。 （b） DNA的双螺旋结构模型和半保留复制机理， 从而解决了基因的自我复制和遗传传递问题。 （c）“中心法则”、“操纵子学说”和遗传密码的破译， 从而解决了遗传信息的流向和表达问题。 （2） 基因工程诞生的技术基础： （a） DNA分子体外切割与连接技术的建立； （b） DNA分子核苷酸序列测定方法的发明； （c） 大肠杆菌遗传转化技术的建立； （d） 琼脂糖凝胶电泳技术的建立与应用； （e）核酸杂交技术的建立， (DNA片段的分离和酶切图谱的构建等) (Southern和Northern杂交术)。 2. 基因工程（Gene engineering或genetic engineering） 定义：在体外试管中应用DNA重组技术将外源核酸分子（基因）插入病毒、质粒或其他载体分子，构成遗传物质重组体，并使之转移到原本没有这类分子（基因）的受体细胞内，而能持续稳定地繁殖与表达。这样的过程叫做基因工程，有时也叫做遗传工程。 （1）基因克隆与DNA克隆 a. 在DNA克隆中插入载体的DNA片段，绝大多数是不含有 基因编码序列的，或者说是不含有完整的基因编码序列的。 b.拿人的基因组DNA为例，全长达3×109bP ，但其中基因的编码序列不到2%。因此绝大多数DNA片段是不含有基因编码序列的。 b. 基因克隆实质上是指应用类似于DNA克隆的技术，分离 纯化含目的基因的DNA片段的实验操作过程。 （2） “克隆”一词的概念 在中文中“克隆”一词兼具名词、动词和形容词三种不同词义。 “克隆”作名词使用时，是指从一个共同的祖先无性繁殖而 来的一群遗传同一的DNA分子、细胞或个体组成的特殊的生命群体； “克隆”作为动词使用时，则是指从同一祖先经过无性繁殖产生这类遗传上同一的DNA分子、细胞或个体的过程； 在中文中“克隆”还可作为形容词使用。例如克隆羊（Cloned sheep）。 （3）名词“克隆”的三种层次： 个体水平┈具有相同基因型的同一物种的两个或 多个个体。例如从同一个受精卵分裂而来的同卵双生子（monozygotic twins），便是属于同一克隆； 细胞水平┈从同一个祖细胞分裂而来的一群遗传上同一的细胞群体。（在细胞学、胚胎学中使用）； 分子水平┈在分子生物学中特指带有一段插入DNA的载体分子/寄主细胞单位。例如大肠杆菌寄主细胞中的重组质粒载体，叫做克隆。 （4）基因克隆步骤： 从 所选用的实验材料中分离、纯化基因组DNA，经适 当限制酶消化切割，产生出DNA限制片段群体 ↓（限制片断切割） 在体外试管中将片段