第八章分子荧光光谱法320课件.pptVIP

第八章 分子发光分析法Molecular luminescence spectroscopy 概论 分子荧光和磷光光谱分析法 化学发光分析法 2. 荧光\磷光寿命及量子产率 芳香族化合物的荧光最常见且最强; 随着环的数目和稠合程度增加，大多数未取代芳烃荧光峰红移，Φ↑。简单杂环化合物不发荧光，但具有稠环结构的杂环化合物都发荧光。 有刚性结构的分子容易发荧光，荧光物质的刚性和平面性增加，有利于荧光发射。 大多数芳香化合物的激发态比基态极性大，溶剂极性增大，则激发态能量降低，荧光波长红移并使荧光强度增强。 除溶剂极性的影响之外，若溶剂和荧光物质发生了特殊的相互作用，如形成氢键或使荧光物质电离状态改变，会使荧光强度、波长改变。形成氢键能力越大，荧光波长发生更大的位移，向短波移动。 例：奎宁在苯、乙醇、水中的荧光强度比为1:30:1000 另，含重原子的溶剂（碘乙烷、四溴化碳）使荧光体荧光减弱。 3. 温度和黏度 温度影响非常大。温度降低会使荧光强度增大；磷光影响更大。 8.2.1.4 荧光磷光的猝灭 Quenching of fluorescence/phosphorescence 实质--与发光过程相互竞争从而缩短发光分子激发态寿命的过程. 一般说来，荧光猝灭法比直接荧光法更灵敏，并具有更高的选择性； 猝灭效应还可用以揭示猝灭剂的扩散速率，或在生物化学研究中用以推测小分子与蛋白质/DNA的结合位点、构象变化等。 猝灭常数公式 动态猝灭方程 区分方法： 8.2.1.5 激发光谱和发射光谱 ③ 荧光光谱通常只含一个发射带 1. 荧光强度与浓度的关系 If=ФfIa Ia=（I0—It）; I0——入射光强度； It——透射光强度； 荧光量子产率（Фf）。 第一单色器选择激发光波长,波长落于紫外区，称为激发单色器。 第二单色器（荧光单色器）与激发光入射方向垂直，用来选择荧光波长，把激发光所发射的容器表面的散射光、瑞利散射光、拉曼散射光以及溶液中杂质荧光滤去，让荧光物质发出的荧光通过照射到检测器上。可提高方法的选择性和准确度。 紫外-可见分光光度计吸收池 8.2.2.2 磷光分析仪器 8.2.3 荧光的常规测定方法 直接测量法 间接测量法 荧光衍生法 荧光猝灭法 敏化荧光法 多组分混合物的荧光分析 8.2.4 磷光的测定方法 低温磷光分析 低温磷光分析中，液氮是最常用的冷却剂。因此要求所使用的溶剂，在液氮温度（77K）下具有足够的粘度并能形成透明的刚性玻璃体，对分析试样具有良好的溶解特性。溶剂应在所研究的光谱区域内没有很强的吸收和发射。 试样的刚性可减少荧光的碰撞猝灭，磷光强。 室温下测量吸附于固体基质上的有机化合物的磷光。所用的基质种类较多，有纤维素载体（如滤纸、玻璃纤维）、无机载体（如硅胶、氧化铝）以及有机载体（如乙酸钠、聚合物、纤维素膜）等。 理想的载体能将分析物质牢固地束缚在表面或基质中以增加其刚性，并能减小三重态的碰撞猝灭等非辐射去活化过程，而本身又不产生磷光背景。 当溶液中表面活性剂的浓度达到临界胶束浓度后，便相互聚集形成胶束。由于这种胶束的多相性，改变了磷光团的微环境和定向约束力，从而强烈影响了磷光团的物理性质，减小了非辐射去活化过程的趋势，明显增加了三重态的稳定性，从而实现在溶液中测量室温磷光。利用胶束稳定因素、结合重原子效应、并对溶液除氧，是MS-RTP的三个要素。 分析物质被激发后经过系间跨越衰减至最低激发三重态，当有某种合适的能量受体存在时，发生了由分析物质到受体的三重态能量转移，最后通过测量受体所发射的磷光强度而间接测定该分析物质。 在这种方法中，分析物质本身不发磷光，而是引发受体发磷光。 含重原子的溶剂，由于重原子的高核电荷增大了S0?T1吸收跃迁和S1?T1系间跨越跃迁的几率，有利于磷光的发生和增大磷光的量子产率。这种作用称为外部重原子效应。 分子中引入重原子取代基，会发生内部重原子效应，导致磷光量子效率的提高。 灵敏度高、选择性好，可用于痕量分析，但是能发生荧光的化学体系不多。 在有机化合物中应用较广。芳香化合物多能发生荧光，可直接测定。脂肪族化合物往往与荧光试剂作用后才可产生荧光。 无机物已有～70种元素