基因工程考试100分攻略.pdfVIP

序言： 1.什么是基因工程？基因工程是如何诞生的？ 答：在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子中，构成遗传物 质的新组合，并使之掺入到原先没有这类分子的宿主细胞中，并能持续 稳定的繁殖。 2. 基因工程的两个基本特征？ 答：（1）跨越天然的物种屏障（2）确定的 DNA 扩增 3.基因工程的步骤和内容？ 答：酶切分离目的基因→重组 DNA 分子→转移至受体细胞增殖→获得 筛选目的重组子(→提取目的基因供进一步研究→重组目的基因功能表 达) 4. 基因工程可以应用于哪些方面? 答：(1)带来体外蛋白质化学的革命: 甲型干扰素，红细胞生成素。 （2）对检测技术的贡献：提供大量高纯靶，提高准确性；病原体检出 （HCV HBV HIV）；遗传病诊断。 （3）直接的遗传性疾病治疗和生物体改造：转基因动植物。 （4）促进对生命现象本质机理的研究：胰岛素基因与糖尿病、癌基因 与抗癌基因。 5.什么是“安全”的宿主—载体体系？ 答：失去自我迁移能力，可以是营养缺陷性，在自然环境下无法生存。 第一章 基因操作基本技术 1、提取细胞总RNA 的原则是什么？如何实施？为什么? 答: 原则：抑制 RNA 酶活性 实施：（1）高温：180℃，2 小时，灭活 RNase （2）二乙基焦炭酸乙酯（DEPC ）,油状有毒, 是一种强烈但不彻底的 RNA 酶抑制剂。它使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。 （3）使用对 RNase 有强烈乙酯作用的细胞裂解剂，如盐酸胍、异硫氰 胍（裂解细胞、抑制酶活性、解聚核糖体） （4）带手套、口罩：阻断 RNA 酶来源，加少污染机会。 （5）季节因素（温度）：RNase 降解RNA 温度高活性高，需要低温进 行。 2.如何进行总RNA 制品质量控制？ 答： 1）RNA 的浓度和纯度测定 A260nm 1 OD=40 g/ml RNA 要求 A /A =2.0 (1.7-2.0 或2.0) A /A 2.0 260nm 280nm 260nm 230nm 2）RNA 的完整性 变性琼脂糖凝胶电泳检查 28S ：18S2 ：1 3）总 RNA 制品的保存 溶液法（TE 或 0.5%SDS 方便 但不稳定) 悬液法（溶液加 3V 乙醇 可靠 但不方便） 3.染色体DNA 制备的原则是什么？各有哪些主要试剂？作用？ 答：原则：祛除蛋白及细胞碎片，祛除 RNA ，保持DNA 分子完整。 主要试剂及作用：SDS （破坏细胞膜结构、变性蛋白质、解聚） EDTA （抑制酶活性）Proteinase K （蛋白酶消化蛋白质） 4.如何进行DNA 样品的鉴定？ 答： A260nm 1 OD=50 g/ml DNA 要求 A260nm/A280nm 1.7 A260nm/A230nm 2.0 5. 有哪些方法可以进行DNA 片段的制备？是如何进行的？ 答：（1）低熔点琼脂糖（羟乙基 60C-65 C 熔化，结果较纯） （2）透析袋法：需要把样品浓缩，把核酸沉淀，而去掉缓冲液。 （3）苯酚抽提法 （4）反复冻融法：多次冻融使凝胶收到破坏，释放其中 DNA ，但回收 率低 （5）电洗脱法 （6）硝酸纤维素膜离心法（7）试剂盒 6.什么是质粒？质粒有几类？ 答：质粒是一类亚细胞有机体，存在于细胞质中独立于染色体的遗传成 分，由环状双链 DNA 组成的复制子。 分为： ①F 质粒（致育质粒，可以通过接合，在供体和受体间传递遗传物质） ②R 质粒（抗性质粒，带有抗性基因，可使宿主菌对某些抗菌素产生抗 性） ③Col 质粒：带有编码大肠杆菌素的基因。 ④降解质粒：可使宿主代谢特殊分子 ⑤侵入性质粒：使宿主菌具有致病能力 7.什么是质粒的转移？什么是质粒的迁移？迁移原理？ 答：质粒的转移：从一个细胞自我的转移到原来不存在这种质粒的另一 个细胞去。 质粒的迁移：由共存的接合型质粒引发非接合型质粒的转移过程。 原理：当相容性的接合质粒和非接合质粒在同一细胞中，非接合质粒中