蒙古沙冬青干旱胁迫全长cDNA文库构建及序列分析.PDFVIP

86 林清芳 等/蒙古沙冬青干旱胁迫全长 cDNA 文库构建及序列分析 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology January 25, 2012, 28(1): 86−95 /cjbcn ©2012 Chin J Biotech, All rights reserved 农业生物技术 cDNA 林清芳，王学峰，李记园，赵鸿彬，王茅雁 内蒙古农业大学生命科学学院，内蒙古 呼和浩特 010018 林清芳, 王学峰, 李记园, 等. 蒙古沙冬青干旱胁迫全长cDNA 文库构建及序列分析. 生物工程学报, 2012, 28(1): 86–95. Qingfang Lin, Xuefeng Wang, Jiyuan Li, et al. Construction and sequence analysis of a drought-induced full-length cDNA library from Ammopiptanthus mongolicus . Chin J Biotech, 2012, 28(1): 86–95. 摘 要: 为了规模化分离强抗逆植物蒙古沙冬青Ammopiptanthus mongolicus (Maxim.) Cheng f.的抗旱基因并探 讨其抗旱性分子机理，用 SMART (Switching mechanism at 5′-end of RNA transcript) 技术构建了其在干旱胁迫 下的全长 cDNA 文库。原始文库滴度为 1.6×107 PFU/mL ，重组率为 97.7 ％，插入片段长度多数接近和超过 1 kb。 对 3 000 个阳性克隆进行了 5′端测序和序列分析，共获得 1 450 条 Unigene 序列。在 Nt 、Nr 和 Swissprot 等数据库中进行 Blast 搜索，结果有 919 条 ( 占63.4 ％) 与已知或推测功能的基因具有同源性，其余 531 条 ( 占 36.6 ％) 为功能未知的新基因。将 Unigene 进行 Gene Ontology (GO) 功能分类，其中与生理过程、细胞过程、 结合、催化活性和细胞组分相关的基因所占比例较高，其次是与细胞器、蛋白复合体、运输和结构分子活性相 关的基因，与刺激应答、基因表达调节、生理生化调节和信号转导相关的基因也占相当比例。许多有功能注释 的 Unigene 属于抗逆相关基因，用半定量 RT-PCR 方法分析其中 6 个基因的表达变化，证明其均参与对干旱胁 迫的应答反应。为进一步开展表达谱分析和克隆、鉴定抗旱基因奠定了基础。 关键词: 沙冬青，干旱，cDNA 文库，序列分析 Construction and sequence analysis of a drought-induced full-length cDNA library from Ammopiptanthus mongolicus Qingfang Lin, Xuefeng Wang, Jiyuan Li, Hongbin Zhao, and Maoyan Wang College of Life Sciences, Inner Mongolia Agricultural University, Huhhot 010018, Inner Mongolia, China Abstract: Ammopiptanthus mongolicus shows very strong resistance to severe environments. To isolate drought-resi