质粒DNA提取的影响因素的研究.docVIP

质粒DNA提取影响因素的研究 生物工程专业学生 指导教师 摘要： [目的]对碱裂解法提取质粒DNA中主要试剂的作用进行研究。[方法]采用不同的溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ分别进行质粒DNA的提取，然后分别对各种溶液所提取的质粒进行琼脂糖凝胶电泳分析，并用紫外分光光度计测定其OD值。[结果]方法3将溶液Ⅲ中的常用的试剂醋酸钾换成醋酸钠后所得到的质粒DNA含蛋白质较多，方法4中溶液Ⅱ的组成成分没有加NaOH，而是只有1%的SDS，得到质粒DNA的量明显偏少。[结论]溶液Ⅰ对实验结果影响不大，溶液Ⅱ中的NaOH关系到所提取质粒DNA量的多少，溶液Ⅲ中的醋酸钾是蛋白质能否去除的一个重要因素。 关键词：质粒DNA 提取 碱裂解法 Study on Influential Factors of Plasmid DNA Extraction Student majoring in bio-engineering Li Yuanyuan Tutor Liu shijuan Abstract： [Objective] It is to explore the action of main reagent alkaline lysismethod of extracting plasmid DNA. [Methods] It adopts different SolutionⅠ、SolutionⅡ、SolutionⅢ to extract DNA in the plasmid. Then the material particle which withdraws to each kind of solution carries on the agarose gel electrophoresis analysis separately, and determines its OD value with the ultraviolet spectrophotometer. [Results] The protein of the plasmid DNA is more than the other methods by method three that the KAc in the SolutionⅢ changes into the NaAc. The quantity of plasmid DNA is obviously decreasing by method four that the component of SolutionⅡ has not added NaOH, but has 1% SDS. [Conclusions] SolutionⅠhas little influence to the experiment result, and NaOH in the SolutionⅡrelates to the quantity of extracting plasmid DNA, KAc in the SolutionⅢ is one of the important factors in the protein, spurification. Key words：plasmid DNA; extracting; alkaline lysismethod 引言　 质粒(Plasmid)是一种染色体外稳定的遗传因子，大小从1 kb~200 kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，具有自主复制和转录能力[1]，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。它可将有用的外源基因通过基因工程的手段送入细胞中进行增殖和表达，是分子生物学试验中常用的工具[2]。质粒DNA是种基因运载工具，在分子生物学中有着极为广泛的应用前景，而质粒DNA的分离提取是分子生物学试验中最基本的工作。目前细菌中提取质粒DNA多采用碱裂解法[3-7]，该法操作简便，其基本原理为：当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。质粒DNA的提取效率和纯度直接影响到分子生物学试验的成功与否，比如酶切、连接、大肠埃希菌的转化、PCR扩增等。质粒提取的得率和质量与很多因素有关，其中最主要的因素有宿主菌的种类和培养条件、细胞的裂解、质粒拷贝数、质粒的稳定性、所用的主要试剂，抗生素、吸附柱的吸附量等。 在此实验中，主要研究主要试剂对质粒