- 1、本文档共13页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
阳性对照本文方法裂解液硅胶柱玻璃珠硅胶柱苯酚抽提乙醇沉淀
* * Journal of immunological method A method for isolating and analyzing human mRNA from newborn stool 2009,V349 2011,08,24 徐振杰 1. Introduction 1. 人类转录组对于人类健康和疾病的研究很有价值; 2. 目前的研究仅限于血液、尿液和软组织; 3. 对于粪便等中的转录子的研究也仅限于成人消化道肿瘤的检测; 4. 目前用于分离人类粪便RNA的方法和试剂未能商业化或者未能去除PCR抑制因子。 本研究发展了Kang的方法,报道了样品间和个体间的mRNA的差异。 2. Materials and Methods 三个婴儿,分别是怀孕27周、27周、29周出生的婴儿,收集其新鲜粪便。三步法提取RNA:玻璃珠法+苯酚-氯仿抽提+硅胶柱纯化。 阳性对照组:成人血液白细胞和E.coli,用试剂盒方法提取总RNA。 总RNA得率:分光光度法,表示为RNA的质量/粪便样品的质量;RNA完整性(RIN)用Agilent 5200 Bioanalyzer分析。 逆转录定量PCR:分别用引物扩增IL-6,IL-8,S100A8(钙网蛋白的一个亚基),EGF(表皮生长因子)和GAPDH(管家基因,用于内参)。 PCR抑制因子的检测:用本文方法及其他三种方法提取新生儿粪便中的RNA,以人的白细胞总RNA 或E.coli总RNA为阳性对照,分别用β-肌动蛋白和16S rRNA基因引物PCR扩增,电泳检测。 2. Materials and Methods 3. Results 3.1 RNA的获得与定量 RNA浓度(RNA质量与粪便质量的比值)较高,完整性较好,RIN达8.6; 比较了4℃和-20℃下储存的样品在0~24h的总RNA得率,显示冷冻4h以内提取最好。 Figure 1 3.2 样品间的差异 以GAPDH做内参,比较了同一样品的三个等份之间的RNA相对产率,结果发现几乎无明显差异,说明该法重复性好。 3. Results Figure 2 3. Results 3.3 不同个体之间以及同一个体不同时间之间的差异 以GAPDH做内参,比较了不同个体之间以及同一个体不同时间之间的RNA相对产率,结果发现差异显著。 Figure 3 3. Results 比较了三个个体在不同时间GAPDH 的含量。结果显示不同时间之间差异显著。 Figure 4 3. Results 3.4 PCR抑制因子 分别用β-肌动蛋白和16S rRNA基因引物PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳。 阳性对照 本文方法 裂解液+ 硅胶柱 玻璃珠+ 硅胶柱 苯酚抽提+乙醇沉淀 Figure 5 4. Discussion 1. 尽管患者体内菌群数量也是一个引起变化的重要来源,但是GAPDH随着时间和个体的变化,仍可以作为上皮细胞或炎症细胞在患者体内变化的替代指标。 2. 样品收集后在室温或者4℃放置4 h对于获得完整的RNA是很重要的,可能是由于存在潜伏期。 3. 本研究所选取的几个指标:GAPDH,EGF,IL-6,IL-8,S100A8。 *
您可能关注的文档
- 超薄锌层热镀锌板的研究进展 - 应用昆虫学报.pdf
- 超平面支持向量机简化性能分析 - 电信科学.pdf
- 资科所资源查找讲习课程 - 政大图书馆 - 国立政治大学.ppt
- 趣味项目介绍.ppt
- 超超临界锅炉水冷壁开裂原因分析 蔡 晖1,刘鸿国2,洪道文2,殷 尊1 .doc
- 跨屏媒体生态及数据闭环.pdf
- 跨孔透地雷达断层扫描影像之解析度与精确度之研究.pdf
- 跨境电商零售进口税收政策 - 汕头海关.ppt
- 路段关键点3—张江路.pdf
- 跨越“数字鸿沟” 构建和谐社会 ——清华大学教育扶贫项目案例研究.ppt
- 国开景区管理作业2试题及答案.pdf
- 国开景区管理作业1-4试题及答案.pdf
- 河南开放大学本科《地域文化(本)》作业练习1-3试题及答案.pdf
- 2024年大型游乐设施操作证考试题库及答案很全.pdf
- 2024年门座式起重机司机考试题库及答案.pdf
- 2022-2023学年河北省衡水市武强中学高二(下)期末数学试卷【答案版】.docx
- 2022-2023学年河北省保定市崇德实验中学高二(下)期末数学试卷【答案版】.docx
- 江西省2017年中小学教师招聘考试高中化学试卷及答案.docx
- 2024年河北省八年级中考生物真题(解析版).docx
- 2024年南阳市社会保险中心(唐河县企业养老保险分中心)(参公)一级科员招录1人《行政职业能力测验》高频考点、难点(答案详解版).docx
文档评论(0)