10.3-第三讲-微生物利用-微生物选择培养和计数.pptVIP

微生物的应用——土壤中微生物的分离与计数;实验设计一;过滤灭菌：使用0.22μm 孔径过滤器;可供参考的资料;以尿素为唯一氮源的固体选择培养基 尿素、细菌过滤器 土壤原液、装有无菌水的试管、移液器、枪头 培养皿、涂布器（三角刮刀） 酒精棉球、镊子 酒精灯、火柴 记号笔 ;可供使用的实验技术;稀释涂布计数法;显微直接计数法;血球计数板，通常是一块特 制的载玻片，其上由四条槽 构成三个平台。中间的平台 又被一短横槽隔成两半，每 一边的平台上各刻有一个方 格网。如左图。 ;每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。计数室构造如左图。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的，即16×25=400小方格，如左图。 ; 每一个大方格边长为l mm，则每一大方格的面积为l mm 2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1 mm，所以计数室的容积为0.1 mm3。 设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数(即0.1mm3中的总菌数)为A/5×25×B。 因为: 1 ml=lc m3=1 000mm3，故: l ml菌液中的总菌数为： A/5×25×l0×l 000×B;可供参考的实验流程;可供参考的实验流程;实验设计方案;结果分析和评价;设计过程中应思考的问题;设置对照实验;配制培养基;; 操作流程及示意图;1 培养基的制备及灭菌 2 准备器皿和材料 3 采集土样;1. 称取待测液样品土l0g，放入装有90ml无菌水的250ml三角瓶中，振荡20分钟，使细胞分散，静置20~30秒，即成10-1稀释液。 2. 再用1ml移液器，吸取10-1稀释液1ml，移入装有9ml无菌试管，即成10-2稀释液。再换一支无菌枪头取10-2稀释液1ml ，移入装有9ml无菌水的试管，摇匀，即成10-3稀释液。以次类推，连续稀释，制成10-4稀释液。;稀释涂布平板法;实验结果;实验拓展;练习题;4、用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中．得到以下几??统计结果，正确的是 A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是2l0、240和250，取平均值233;Thank You !