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第二章 微生物形态学 ;第一节 研究微生物的基本方法 ;微生物的研究方法 （1）显微镜观察法：原始、染色 （2）纯种分离 （3）培养及接种 （4）生理特性试验 ;一、显微镜观察法 ;1．压滴法––––观察活的微生物 多用于霉菌、酵母的观察 方法： 载玻片→－→挑种－→盖玻片覆盖－→显微镜观察 ;2、悬滴法 观察微生物的运动状态 方法： 盖玻片－→滴样－→反转盖玻片－→放在凹玻片上方－→固定－→培养－→镜检 ;3、染色法 目的：使被观察的微生物与背景色差增加，以利于观察。 用途： ①显示细胞结构、探查成分的性质、分布 ②鉴别细菌的种类； ③区别细胞的死活； ④粗略测定细菌的等电点。 ;（1）单染法 只用一种染料使微生物着色的方法称之 常见染料如美兰、龙胆紫、花红、蕃红等。 方法： 载玻片－→涂片－→干燥－→固定－→染色－→水洗－→干燥－→镜检 Note：若观察活菌时，则不需固定。 要求：①涂片要均匀；②染色时间要准确。; 例如：区别酵母细胞的死活（美兰法） 活细胞——代谢能力强，还原美兰为无色。 死细胞——代谢能力弱，不能还原美兰，染成兰色。 ;（2）复染色法 使用两种或两种以上的染色剂使微生物染色的方法，称为复染色法。 ① 革兰氏染色法，1884年丹麦医生G. Gram首先使用，以后多次改良。 使用三种染色剂：草酸铵结晶紫，路哥氏碘液，蕃红，可以用来鉴别细菌，又称鉴别染色法。;细菌－→革兰氏染色： G（＋） 阳性 兰色 G（－） 阴性 红色;改党钥睡搽饮刮锅祸鬼销液尚拟榨炊醉若漱秩吵滑乎就舷哗椿枪鸟破玄哈第二章++食品微生物形态学+1第二章++食品微生物形态学+1;② 抗酸染色法 ——鉴别结核杆菌 染色剂 石炭酸复红、碱性酒精（脱色）、美兰 微生物－→ 抗酸染色法 红色，抗酸性微生物 兰色，非抗酸性微生物 另外，特殊染色法——芽孢、荚膜、鞭毛染色等。 显微镜观察微生物是微生物学的基本技能，必须掌握;二、微生物的纯种分离 ;1、平板划线法 范围：常用来分离酵母、细菌等微生物 方法：用无菌的接种环取一环菌液，在固体培养基表面划线，在划线过程中使其在平板上稀释，使微生物细胞分散在平板上，由细胞在平板上长出菌落。从一个细胞形成的菌落，可以为单纯的菌落。 实际应用时，以该过程进行多次重复。 划线操作：扇形；连续；方格 平行；“之”形 ;2、稀释分离法 范围：适于所有微生物的分离。 方法：通过不断的稀释使被分离的样品分散到最低限度，然后吸取稀释样品注入平板，涂匀于平板表面，则分离的微生物被固定在原处而生成菌落。 实验为操作方便一般采用 9.0 ml无菌水(生理盐水)+1.0 ml样品液。 或者:4.5+0.5;99+11,19+1等;3、特殊培养基培养分离法 范围：适于所有微生物 （1）选择培养基 培养基中一些组成分对某些微生物有抑制或促进作用，从而使其与其它微生物区别开来。 例如：革兰氏阳性细菌G（+）可被碘液抑制，G（－）细菌生长出来。 ;（2）鉴别培养基 鉴别培养基的特殊成分使微生物的菌落呈现特征，则使于识别和挑选。 ;4、单细胞分离法 范围：霉菌、酵母、原生动物等个体较大的微生物。 工具：单细胞分离操作器。 原理：在显微镜下挑取分散的单个细胞，然后培养，达到分离的目的。 Note：纯种分离时的方法应用经常联合使用，如3和2联合使用等，可以提高分离效果。 ;三、接种和培养 ;1、微生物的接种方法： （1）涂布法：固体培养基表面，均匀涂布。 （2）划线法：固体培养基表面，斜面划线、平板划线 （3）点种法：固体培养基表面，局部点种。 （4）穿刺法：固体培养基内部，点穿刺、线穿刺。 （5）浸洗法：液体培养基 （6）活体接种：医学上常用，采用动物培养病原菌 动物接种、离体活组织接种等 鸡胚胎接种：检查感冒病毒。 ; 2、微生物的培养 （1）分类 O2需求不同：好氧培养（发酵） 厌氧培养（发酵） 兼性厌氧培养（发酵） ;痹搪榔夯添租稍系萎鉴穷烁航什萧滞眷化匿基颂镶信宜媚颁误牡阉倡桐庙第二章++食品微生物形态学+1第二章++食品微生物形态学+1;培养方法不同：分批培养（发酵) 连续培养（发酵） 补料分批培养（发酵） ;分批培养: 一次进料，一次出料;连续培养：连续进料，连续出料;补料分批培养