人PR免疫组化试剂盒.PDFVIP

人人 PRPR 免疫组化试剂盒免疫组化试剂盒 人人 PRPR 免疫组化试剂盒免疫组化试剂盒 该试剂盒以 HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate， HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性 PR 抗原。该试剂盒具有灵 敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的 PR 一抗与相应靶抗原 结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入 HRP-SA，形成抗原—特异 一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。 试剂盒所含试剂：试剂盒所含试剂： 试剂盒所含试剂试剂盒所含试剂：： 试剂 A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用） 试剂 B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL 试剂 C （原装进口分装）已稀释的即用型 PR 一抗（2.5ml） 试剂 D （原装进口分装）生物素化羊抗兔 IgG 1 支 （浓度 1.5 mg/mL，稀释比为 1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液 20ml 试剂 E HRP-SA 复合物 1 支（浓度 1 μM，稀释比 1:50~1:200）100 μL 试剂 F DAB 显色液 5ml 用户自备试剂：用户自备试剂： 用户自备试剂用户自备试剂：： 1． 10mM TBS（pH7.2~7.4） 三羟基氨基甲烷 1.21g 氯化钠 7.6g 加蒸馏水 800mL，浓盐酸调 pH 值至 7.2~7.4，最后定容至 1000mL TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比） 2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液） 10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液 柠檬酸 0.38g 柠檬酸三钠 2.45g 加蒸馏水 900mL，浓盐酸调 pH 值至 6.0，最后定容至 1000mL 或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0） EDTA·2H2O 186.1g 柠檬酸三钠 2.45g 加蒸馏水 700mL，用 10mM NaOH 调 pH 值至 8.0，最后定容至 1000Ml 3. 缓冲甘油封固剂 10 mL 4. Tween 20 5 mL 石蜡包埋组织切片免疫染色 石蜡包埋组织切片免疫染色 石蜡包埋组织切片免疫染色石蜡包埋组织切片免疫染色 实验步骤（实验步骤 （建议方案建议方案）：）： 实验步骤实验步骤 （（建议方案建议方案）：）： 石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度 1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr； 2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次 10 min； 3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85% 乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min； 4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温 度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2× 2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复， 直接进入第 5 步封闭。 5.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min； 6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜； 7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）； 8.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min； 9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育 30 min； 10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）； 11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min； 12.加 HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM）， 37℃湿盒中孵育 30 min； 13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）