基于对虾白斑综合症病毒极早期启动子的新型杆状病毒表达.PDFVIP

!#$% #’’()*+,%*#) 研究简报 微生物学报 !#$ %’()(*(+$ ,-$ （）： ； ! #$% ’ #$%( ! )*+,*-.*/ $00 ； 1))2 000# ’ 3$0 42 ## ’ #%5 6 7,,+ ： 5 589:/;= ? @- ? A ? A;5 A,-@A/9A; 基于对虾白斑综合症病毒极早期启动子的新型杆状病毒表达 载体的构建与分析 # $ # 吕利群 ，徐鸿绪 ，王浩 # （上海海洋大学省部共建种质资源发掘与利用教育部重点实验室，上海 $0#03 ） $ （中山大学第一附属医院检验医学部，广州 %#00(0 ） 摘要：【目的】构建携带有受杆状病毒多角体启动子控制的疱疹性口腔炎病毒糖蛋白（ K*@A:=/ ,9-,@,@ K@/: N=OA9+/9,*@; ， ）和受白斑综合症病毒极早期基因（ ， ）启动子控制的绿色荧光蛋 P)P Q @--*M@,*=OC*/=O N*;* # @*# 白（ ， ）两个表达阅读框的新型重组病毒 ，分析其在无脊椎动 *;7;A*M N/**; R=:9/*A*;, +/9,*@; IQGS KTACQCIQGS 物和脊椎动物细胞系中表达报道基因的能力。【方法】利用 BACE9CBA 系统构建重组杆状病毒，利用病毒感 染或转导实验介导报道基因在待测细胞系中的表达，用荧光显微镜和免疫印迹技术分析报道基因在待测细 胞系中的实时表达情况。【结果】成功构建了分别含 和 启动子两个阅读框的重组杆状病毒 P)P Q @*# KTACQC IQGS ，发现KTACQCIQGS 可以在无脊椎和脊椎动物细胞系中有效表达报道基因IQGS ，免疫印迹实验显示，在 不同时间点 于这两类细胞中的表达存在差异。【结论】基于白斑综合症病毒 启动子并携带有 IQGS @*# P)P Q 表达框的单一杆状病毒载体可以实现同时在不同种类细胞系中有效表达外源基因。本文构建的新型杆状 病毒表达载体有希望普遍应用于基础和应用生物学研究。 关键词：白斑综合症病毒 启动子；杆状病毒；疱疹性口腔炎病毒糖蛋白 @*# 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） )#D T 000 #C3$0 $00 0C#$%C03 用基于昆虫细胞的杆状病毒表达系统表达外源 杆状病毒作为基因导入载体的研究已成为基因工程 基因有很多优点：表达量高，可以表达高分子量的蛋 领域的一个研究热点。在已有的杆状病毒载体的研 白质，可以同时表达多个基因等等。然而昆虫细胞 究工作中，外源基因都是被哺乳动物特异性的启动 和哺乳动物细胞的蛋白合成后修饰加工存在差异， 子介导表达的，目标蛋白质在繁殖病毒的昆虫细胞 ［ ］ 许多在昆虫细胞中表达的哺乳动物细胞蛋白质没有