杂质 自身对照 校正因子.pdfVIP

杂质测定中加校正因子的主成分自身对照法： 在杂质研究中，因某一杂质与主成分在某一波长下的响应因子不在0.9-1.1 范围 内，可考虑采用加校正因子的主成分自身对照法。此校正因子可直接载入各品种 项下，用于校正杂质的实测峰面积。这些需做校正因子的杂质，通常以主成分为 参照，采用相对保留时间定位，其数值一并载入各品种项下。（可以理解为校正 因子具有法律效应的作用） 关于校正因子的理论知识如下： 色谱定量分析的依据是被测组分量与检测器的响应信号(峰面积或峰高)成正比。 但是同一种物质在不同类型检测器上往往有不同的响应灵敏度；同样，不同物质 在同一检测器上的响应灵敏度也往往不同，即相同量的不同物质产生不同值的峰 面积或峰高。这样，各组分峰面积或峰高的相对百分数并不等于样品中各组分的 百分含量。 色谱的检测器对不同物质有不同的响应，换句话说，1mg 化合物A 在检测器上 能产生 1000mAu 的响应，但同样是1mg 的化合物B 在该检测器上也许就只能 产生847mAu 的响应，所以我们不能在检测器输出1000mAu 的响应时就认定样 品中一定含有1mg 化合物，这时就必须引入定量校正因子。校正后的峰面积或 峰高可以定量地代表物质的量，校正因子的作用就是反映某物质的量与检测器响 应之间的关系。 定量校正因子分为两种： 1、绝对定量校正因子f；f=M/A，（其中M 代表被测物质的量，A 代表检测器信 号响应，可以是峰面积或峰高），其意义为单位响应所反映的物质量。绝对定量 校正因子，即单位峰面积所代表的物质量。这是以峰面积表示的定量校正因子， 也可以用峰高来表示定量校正因子。此外，也有用它们的倒数来表示的，简称为 响应值。绝对定量校正因子的值随色谱实验条件而改变，因而很少使用。 2、相对定量校正因子f ；f=fi/fs= （Mi/Ai）/(Ms/As)= （Mi*As）/ （Ms*Ai）, （其 中i 代表被测定物质，s 代表选定的基准物质）。定义为某物质i 与所选定的基准 物质s 的绝对定量校正因子（即单位峰面积所代表的物质的量）之比。 绝对定量校正因子一般用于外标法，相对定量校正因子一般用于内标法。 色谱法的含量测定中之所以要先用待测成分的对照品来建立校准曲线，然后才用 这个曲线来计算待测样品中该化合物的含量，实际上就是在测定样品前先确定校 正因子。日常操作中我们都是以：M 标/A 标=M 样/A 样 直接计算样品含量了， 所以没太注意有什么校正因子，事实上只要将公式作一个简单的变形：M 样=A 样* （M 标/A 标），不难看出式中的（M 标/A 标）其实正是定量校正因子f，那 么M 样=A 样*f 了。（简单来说可以理解为标准曲线的斜率) 所以，用面积归一化比法做含量测定时，不可简单地认为各成分的峰面积百分比 就是它们的含量百分比哦，理由如上所述，各成分含量与响应的比例关系可不一 定都相同啊！ 理论知识已经放在前面了，那就来实际操作的，在杂质分析的测定中，加校正因 子的主成分自身对照法，那校正因子究竟怎么测定呢？ 有几个问题需要明确的： 1、测定校正因子时，如何取主成分的浓度，如何取杂质的浓度？药典上说：精 密称取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进 样测定计算。那“适量”是如何确定的呢？范围是多少？ 2、主成分取几个浓度，杂质取几个浓度？要做线性吗？校正因子的测定浓度应 该要在线性范围内？否则无法定量，而不同浓度进样的校正因子误差要符合什么 要求？ 3、需要求多少的F 值（F 值究竟是多大）才能够符合做标准的规定。因为是加 校正因子的主成分的自身对照法，F 值必须是在一定范围内是一个定数，才能写 到标准里面去吧？ 4、响应因子与校正因子是成倒数关系，计算响应因子是否需要做RSD，那计算 响应因子的主成分和杂质的浓度是选择多少为合适？ 5、测定相对校正因子是否需要做方法学验证？验证的内容有哪些？（线性范围？ 重复性？还有么？需要做线性吗？相似浓度下或线性范围内的校正因子的重复 性是不是应该在2%以内？） 6、若已知杂质（合成的中间体，自己可以合成，但买不到对照品，只能做结构 确认）无标准品，只用面积归一化法测定该物质的百分含量，再测水分、干燥失 重、残渣作为必要的补充和扣除就可以了么？测定时首先准确称量主成分和已知 杂质，然后将它们混合均匀进样，分别测出其峰面积，再进行计算。这样就可以 了么？ 7、测定校正因子后，操作方法可如下： 取供试品溶液和自身对照溶液，分别进样，测量供试品溶液色谱图上杂质的峰面 积，分别乘以相应的校正因子后