HPLC法测定麦麸中阿魏酸的含量.docVIP

HPLC法测定麦麸中阿魏酸含量 摘要 目的测定麦麸中的含量，RP-HPLC法∶75∶0.75）为流动相，在320nm波长处检测。此方法简便、快速、重现性好，适用于中的定量分析。convenient and suitable for the determination of ferulate. Key word : bran；ferulate；RP-HPLC 阿魏酸存在于麦麸中，而不同品种的麦麸，其阿魏酸的含量不同，可以通过测定阿魏酸的含量来比较不同品种的差异。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 高效液相色谱仪；电子天平；纯水仪；超声波清洗机等。为色谱纯、水为纯水、、乙醇以及盐酸为分析纯等；对照品(sigma公司提供)。μm，phenomenex)；流动相：甲醇-水-冰乙酸（25∶75∶0.75），pH=3；柱温30℃；流速1.0 mL·min-1，检测波长320nm，进样量5μL。 2.2 样品前处理 称取10g烘干至恒重的小麦籽粒用粉碎机粉碎后，浸入100mL蒸馏水中加淀粉酶0.2g，在55℃下，用4%NaOH调pH=8.0，于恒温水浴锅水浴1h（每10min定期振荡）,再用胃蛋白酶0.1 g在37℃下，用6 mol·L-1HCl溶液调pH =2，于恒温气浴摇床中再次震荡搅拌1h。之后再用四层纱布过滤，取滤渣于105℃下烘干2h灭酶，得干沉淀，再次称重（记录实际称量质量）。干沉淀用体积比2∶1的碱醇（质量分数4%的NaOH、无水乙醇）溶液按料液比1∶12(w/v)浸润，在40℃下加入0.3g无水Na2SO3,超声0.5h。用6mol·L-1HCL溶液调节pH =2，6000 rpm·min-1离心15min，去残渣。上清液于50℃旋转蒸发出其中的乙醇。将余液用流动相定容至50mL，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过即可。 2.3制作标准曲线 配制浓度为16.92ug/ml的标准样品，分别以1、2.5、5、7.5、10、15μL标准的回归方程 进样体积ul 进样量ug 保留时间 进样量ug 峰面积 1 1 0.01692 11.582 0.01692 60878.398 2 2.5 0.0423 11.557 0.0423 181788.703 3 5 0.0846 11.615 0.0846 268119.906 4 7.5 0.1269 11.548 0.1269 495168.5 5 10 0.1692 11.54 0.1692 690000 6 15 0.2538 11.465 0.2538 1056363.625 标准曲线 标准样品的色谱图 2.5.2待测样品： 样品测定 进样体积ul 保留时间 峰面积 样品A 样品B 样品C 样品D 样品E 5 5 5 5 5 11.665 11.615 11.632 11.632 11.565 3078541.75 5805272.5 2464444 2240050.75 4081915.25 待测样品色谱图 样品A的含量：7.7677mg 样品B的含量：14.5845mg 样品C的含量：6.2325mg 样品D的含量：5.6715mg 样品E的含量：10.2762mg 各样品阿魏酸含量有差别，样品B含量最多，样品D含量最少。 3讨论 因为阿魏酸是极性的，所以采用反相色谱，通过以水为流动相的主体，加以甲醇和冰醋酸为调节剂。固定相则采用了化学键和固定相，即BDS C18柱。这使阿魏酸有较好的分离度。在阿魏酸线性浓度范围内，采用标准曲线法，测出待测样品的峰面积，就可以利用回归方程计算出样品中阿魏酸的含量。此方法有较高的分离度和灵敏度，干扰较小，是测定阿魏酸比较好的方法之一。 参考文献: 仪器分析（第四版） 高等教育出版社 仪器分析实验指导（修订版） 复旦大学出版社