实验报告六高效液相色谱法用于有机农药残留的分离和分析.docVIP

华南师范大学实验报告 学生姓名 学号 ： 专业：化学师范 年级、班级：09级化四 课程名称：近代有机分析方法和实验实验 时间：2011年11月9日 实验六：高效液相色谱法用于有机农药残留的分离和分析 实验目的应用高效液相色谱法对磺胺类抗生素的定性和定量检测学习谱图和数据的处理方法 实验原理磺胺族抗生素包括磺胺嘧啶，磺胺二甲嘧啶，磺胺甲噁唑，等, 被广泛应用到水产、畜禽类养殖中。它们被添加到动物饲料中, 以促进动物的生长以及防治各种疾病, 如果不能严格控制停药期, 很容易造成在动物肉和组织中残留, 给人体健康带来危害, 因此世界各国对畜禽肉中的磺胺族残留都有严格的限量要求。GB/T 5009.116- 2003 用液相色谱法检测畜禽肉中的磺胺类药物残留量, 操作简单快速,但是该方法灵敏度比较低。 实验仪器与试剂仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18色谱柱 试剂：磺胺嘧啶标准溶液，磺胺吡啶标准溶液，磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合液，乙腈（AR），0.05%甲酸溶液 磺胺嘧啶C10H10N4O2S 250.28 252-258℃ 白色或类白色结晶或粉末，无臭无味，遇光色渐变暗溶于稀盐酸，微溶于乙醇或丙酮，几乎不溶于水，易溶于氢氧化碱溶液或氨溶液C11H11N3O2S 249.49 191-193℃ 黄棕至白色粉末实验步骤准备准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。0.05%甲酸溶液根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤称取0.0g的磺胺嘧啶、磺胺吡啶用甲醇定容至.0 mL，用0.45μm滤膜过滤0.45μm滤膜。磺胺嘧啶和磺胺吡啶1?mg/mL（1000ppm）。分别吸取磺胺嘧啶和磺胺吡啶标准溶液各5mL，置于10?mL容量瓶中磺胺吡啶和磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合0.5 mg/mL（500ppm）。 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站）。波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键[Enter]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 , w4流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1mL/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。 更换流动相并排气泡将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。 平衡系统按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开在线色谱工作站软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下数据收集页的 [查看基线] 按钮。等度洗脱方式 ; g5 J; Q按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.6操作。观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。进样进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取。 峰号 保留时间 面积 面积% 峰高 1 9.0395 100.0000 501938.0 混合样谱图 峰号 保留时间 面积 面积% 峰高 1 8.963 5190936.8 4