甘油葡萄糖共发酵一个以利用丙酸杆菌生产丙酸的成熟的工艺..docVIP

甘油/葡萄糖共发酵：一个以利用丙酸杆菌生产丙酸的成熟的工艺 摘要 共发酵是一个提高主体代谢产物的有效的策略,以甘油和葡萄糖作为碳源可以用来研究丙酸的生产。带着提高丙酸生产量的目的，我们对丙酸杆菌利用甘油、葡萄糖以及它们混合物对丙酸生产的作用进行了研究。培养基中丙酸的产量从0.475μg甘油和0.303μg葡萄糖独自发酵提高到了0.572μg利用甘油/葡萄糖4/1 (mol/mol)共发酵。最大的丙酸和底物转化率分别为21.9克L-1和57.2%（w/w）。明显高于以甘油或葡萄糖为唯一碳源。在分批补料发酵试验中，最大的丙酸产量和底物转化效率分别为29.2 g L-1和54.4%（w/w）。这些结果表明，甘油/葡萄糖共发酵可以更好的替代传统的丙酸发酵。 引言 丙酸，一种重要的防霉剂和化学中间体，被广泛的应用于工业生产尤其是食品工业中。2006年，丙酸的全球年生产能力为349000吨。预测2010年前年需求增长为2.5%。目前几乎所有的丙酸均是由石油化工流程生产的。但丙酸的生物合成因其可再生的生物原料来源和消费需求的日益增长有望成为一个有前途的选择。虽然目前已经对由丙酸杆菌发酵生产乳酸产生了浓厚的兴趣。但生产丙酸的浓度、产量和生产效率相对较低，这是阻碍其进行经济利用的最主要的障碍。 碳源，是在丙酸生产过程中最重要的营养元素。丙酸杆菌可以利用不同的碳源来进行菌株生长和形成有机酸。但特定的碳源对细胞的生长以及底物的消耗量和副产物的形成有极大的影响。碳源通过细胞反应影响丙酸杆菌的丙酸发酵动力学，重新分配发酵最终产物来实现氧化还原平衡。丙酸发酵过程中不同碳源的代谢模式已经通过使用代谢化学计量分析证明，同时也被证明存在不同的控制机制。为了达到最大的丙酸产率并减少代谢产物的生成，需要对丙酸生产过程中的碳源利用做进一步优化。 传统丙酸发酵通常采用单一碳源，混合碳源也已被提出作为有用的替代品。通常，唯一的碳源不能满足丙酸杆菌生长和丙酸的生产要求。混合碳源可以通过改变丙酸发酵的动力和最终产品的成分来提高丙酸生产量。尽管用于丙酸生产的大量各种碳源已经被研究出来，但混合碳源仍然很少被考虑。 目前的研究旨在提出甘油/葡萄糖共发酵理论，也为了开发一个丙酸生产的新型的生产工艺。调查的主要目的是评估在P丙酸的批量和分批发酵中使用甘油/葡萄糖混合物的优势。因此，甘油/葡萄糖的混合物是被提出来提高丙酸生产量，并且达到更高效的生产工艺的。材料与方法 菌和培养基 从CGMCC（中国北京）收集的丙酸菌和丙酸CGMCC1.2225(ATCC4965),可以在含有葡萄糖，甘油或者混合底物的基本培养基生长。种子培养基（pH 7）[ 7 ]包括0.5%胰蛋白胨大豆，酵母， 0.25%，和0.15%的磷酸二氢钾。C。除非另有说明，发酵是在一个生物玻璃生物反应器中进行的，（BIOSTAT B加，B.布劳恩，德国）该生物反应器包括由最初的含氮喷射介质在厌氧条件先产生的2 L产物培养基。使用5%（体积/体积）的接种物。温度，PH值，搅拌速度分别保持在30°C，6.5，和150转。所有发酵都进行重复。 测定 细胞干重（DCW）从OD值计算。一个单位OD相当于0.325 Lˉ1DCW。葡萄糖是使用sba-40 C固定化酶生物传感器测定的（生物研究所，山东省科学院，中国），而甘油是利用比色法测定的。丙醇，乙酸和丙酸，利用气相色谱定量（瓦里安450-GC，美国），用毛细管柱（FFAP；FFAP; 25 m x 0.25 mm x 0.20 μm；美国），火焰离子化检测器（FID），并且注射和检测端口温度设置在240°C。毛细管柱的温度最初是在80°C，维持 1分钟，后来增加到25°C /分钟，维持1.6分钟；30°C /分钟，维持0.5分钟；25°C /分钟，维持3分钟，并固定180°C维持1分钟。琥珀酸的测定如前述。 结果和讨论 甘油和葡萄糖发酵的比较 使用不同氧化态的碳源影响丙酸发酵的动力。甘油和葡萄糖发酵的比较可以更好的理解细胞如何响应这些底物和分配碳通量。在P.詹氏40 g Lˉ1 甘油或葡萄糖进行分批培养，选定的参数见表1。发酵液中丙酸的最大浓度为18.1克Lˉ1 是出现在以甘油为唯一碳源的时候，而使用葡萄糖作单一碳源的时候浓度只有11.5 g Lˉ1（图1）。葡萄糖作为碳源时，生产速度和丙酸产量分别为0.068 g lˉ1hˉ1和0.303ggˉ1，而使用甘油时，这两个值均较高（分别为0.108 g lˉ1hˉ1和 0.475 ggˉ1）。看来，丙酸发酵时，甘油优于葡萄糖，但是，当考虑DCW，葡萄糖是优选的碳源，葡萄糖可以得到6.8 g Lˉ1DCW，这是较高于从甘油获得的3.3 g Lˉ1DCW的。（表1；图1）。因此，由这种细菌研究甘油/葡萄糖混合物对细胞生长和丙酸生产的