－光光度技术的原理和应用.PDFVIP

5-?光 光 度 技 术 的 原 理 和 应 用 尹传胜，李 涛 (临沂市人民医院，山东临沂 276000) (中图分类号]TH773 (文献标识码]B (文章编号]1002—2376 (20O6)07—0017—02 [摘 要)本文简要介绍了分光光度技术的原理、分光光度计的结构及其主要的应用。 [关键词)分光光度技术；原理；应用 每种物质都具有其特异的吸收光谱，不同物质 由 区，400～760ilia为可见光区，760～10，000nln为红 于其分子结构不同，对不同波长线的吸收能力也不 外光区。 同。分光谱来鉴定物质性质及含量的技术，分光光度 1．2 朗伯 一比尔 (I．ambert—Beer)定律 技术理论依据是指利用物质特有的 I．ambert—Beer定 朗伯 一比尔定律是比色分析的基本原理，这个定 律。分光光度技术是光电比色技术的发展，光电比色 律是有色溶液对单色光的吸收程度与溶液及液层厚度 技术只限于在可见光区，分光光度技术则可以扩展到 间的定量关系。此定律是由朗伯定律和 比尔定律归纳 紫外光区和红外光区。 而得。 1 分光光度技术的原理 (1)朗伯定律 1．1 光的基本知识 一 束单色光通过溶液后，由于溶液吸收了一部分 光是由光量子组成的，具有二重性，即不连续的 光能，光的强度就要减弱：若溶液浓度不变，则溶液 微粒和连续的波动性。波长和频率是光的波动性和特 的厚度愈大 (即光在溶液中所经过的途径愈长)，光 征，可用下式表示： 的强度减低也愈显著。 ’ (2)朗伯 一比尔定律 = 如果同时考虑吸收层的厚度和溶液浓度对光吸收 式 中：入为 波 长，V 为 频 率，c为光 速 等 于 的影响，则必然将朗伯定律和比尔定律合并起来，吸 299770II【rs。光属于电磁波。自然界中存在各种不同 光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比，这就 波长 的电磁波，分光光度法所使用 的光谱范 围 是朗伯 一比尔定律。 在200～10，000nm之间。其中200～400nm为紫外光 1．3 分光光度计基本结构 能从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离 收稿 日期 ：20o6—04—19 出来并测量其强度的仪器称为分光光度计。分光光度 维普资讯 计因使用的波长范围不同而分为紫外光区、可见光 光 电池的组成种类繁多，最常见的是硒光电池。当连 区、红外光区以及万用 (全波段)分光光度计等。无 续照射一段时间会产生疲劳现象而使光电流下降，要 论哪一类分光光度计都由下列五部分组成，即光源、 在暗中放置一些时候才能恢复。因此使用时不宜长期 单色器、狭缝、样品池，检测器系统。 照射，以防止光电池因疲劳而产生误差。 (1)光源 光电管装有一个阴极和一个阳极，阴极是用对光 要求能提供所需波长范围的连续光谱 ，稳定而有 敏感的金属 (多为碱土金属的氧化物)做成。光愈 足够的强度。常用的有 白炽灯