Ybox结合蛋白1在胃癌组织中的表达及意义.doc

　　Ybox结合蛋白1在胃癌组织中的表达及意义 【关键词】 胃癌;Ybox结合蛋白1;免疫组织化学;原位杂交 　ABSTRACT: Objective To investigate the expression and significance of Yboxbinding protein1(YB1) in patients a of different stages. Methods Expressions of YB1 protein and mRNA in specimens of normal tissues, intestinal metaplasia, early gastric cancer and advanced gastric cancer munohistochemistry and in situ hybridization. Results There RNA in normal gastric tissues. Houcosa in intestinal metaplasia. YB1 ucosa of epithelial cells in the early stage of gastric cancer, and its expression ay be related to the early pathogenesis and development of gastric carcinoma. 　　KEY HCⅡ类基因的转录[5]。研究表明，YB1可被丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt 磷酸化，该磷酸化使得YB1的mRNA5末端的结合力加强，从而使其易位活性增强，这也可能与细胞的增殖和转化相关[6]。 　　以上研究均表明，YB1在肿瘤细胞的增殖及肿瘤的发生、进展和预后中均发挥其生物学作用，但其在胃癌中的研究尚未见报道。因此，我们采用免疫组织化学和原位杂交的方法检测了YB1在胃癌组织中的表达情况，以探讨其可能的作用机制。 　 　1 材料与方法 　　1.1 标本采集 收集病理确诊手术切除的胃腺癌标本63例，其中早期胃癌25例，进展期胃癌38例;肠黏膜化生组织23例。以上患者无其他系统性疾病，在术前均未接受放射和化学 治疗 。21例正常组织来自胃镜活检组织。其中男12例，女9例;35～50岁者12例，51～72岁者9例。胃癌组与正常组的一般情况比较无显著差异性。 　　1.2 主要试剂 YB1多克隆抗体(5μg/mL)为日本学者赠送;原位杂交试剂盒购自武汉博士德生物公司;YB1的探针序列为：5′gt;GCCGCTGCCCGTAG 　　TGCCGGGCTTGGTGTClt;3′，地高辛标记，与人类其他基因无同源性。 　　1.3 方法 　　1.3.1 YB1的免疫组化定位 新鲜胃癌组织于100mL/L的甲醛溶液中固定48h，石蜡包埋;切片经脱蜡、水化后，用30mL/L双氧水孵育10min，以去除组织内固有的过氧化物酶。枸橼酸缓冲液修复抗原：92℃水浴15min，室温冷却1h;血清封闭液、卵白素封闭液和生物素封闭液各孵育15min，以去除非特异性染色。一抗4℃结合21h，二抗孵育40min，辣根过氧化物酶标记的链霉素复合物孵育30min，二氨基联苯胺(DAB)染色，苏木素复染。阴性对照用羊血清代替一抗或二抗。 　　1.3.2 原位杂交方法 参照 文献 所述[67]，步骤如下：活检组织经固定、包埋、切片、脱蜡、水化后，用30mL/L双氧水(DEPC配制)孵育10min，DEPC水洗6min;蛋白酶K 37℃消化30min，以去除阻碍探针结合的表面蛋白;PBS和DEPC各水洗6min;每片加预杂交液20μL，42℃孵育2h;加入13pmol/L的寡核苷酸探针20μL，42℃杂交22h;2×SSC和1×SSC液各洗15min;羊血清封闭液37℃封闭30min，生物素化的鼠抗地高辛37℃孵育30min，辣根过氧化物酶标记的链霉素复合物37℃孵育30min;DAB染色，苏木素复染。阴性对照用预杂交液代替杂交液。阳性判断标准：角质形成细胞中有棕黄色颗粒沉着，阴性无此沉着。 　　1.4 统计学方法 应用SPSS13.0软件进行统计分析。组间两两比较采用卡方检验和精确概率法，以Plt;0.05为差异有统计学意义。 　　Fig.1 Expression of YB1 in normal tissues, intestinal metaplasia and gastric carcinoma tissues (DAB, ×200) 　　A：正常组织中YB1无表达;B：肠化生组织中YB1阳性染色于胃黏膜上皮细胞中，但表达较弱;C：早期胃癌中YB1表达于全层胃黏膜上皮细胞中;D：