乙烯雌酚诱导兔骨髓基质干细胞向成骨分化的实验研究.doc

　　乙烯雌酚诱导兔骨髓基质干细胞向成骨分化的实验研究 ：张世民，吕刚，梅晰凡，胡萌 【摘要】 目的 观察乙烯雌酚(Diethylstilbestrol)对兔骨髓基质干细胞(bone marroal cells，BMSCs)成骨分化的影响，探讨乙烯雌酚对骨髓基质干细胞的成骨调节及其对骨骼系统的影响。方法 用不同浓度(0,10-10～10-5 mol/L) 乙烯雌酚干预1周龄新西兰长耳白兔的骨髓基质干细胞，并设地塞米松10-8 mol/L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、维生素C 50 mg/L为阳性对照，在干预不同时间分别用茜素红染色鉴定钙化结节形成、全自动生化仪测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)活性。结果 10-8 mol/L乙烯雌酚干预25 天后开始出现钙化结节;10-8、10-7 mol/L乙烯雌酚干预组ALP在14、21 天时显著增加。结论 乙烯雌酚能促进兔骨髓基质干细胞的成骨分化，并能通过成骨细胞的数量来发挥骨骼系统的保护作用。 【关键词】 乙烯雌酚;骨髓基质干细胞;成骨分化 Abstract: Objective To observe the effect of diethylstilbestrol on the osteogenic differentiation of rabbit bone marroal cell and to discuss the regulative effect of coumestrol on bonemarroal cells. Methods The present study firstly intervened BMSCs obtained from 1-ol/L), or Dexamethasone 10-8mol/L, β- Sodium Glycerophosphate 10 mmol/L, vitamin C 50 mg/L for positive control. Then, Calcium nodes atic biochemistry Analyzer.Results Osteogenic differentiation: BMSCs induced to osteogenesis formed mineralized nodular structures after 25 days in 10-8mol/L diethylstilbestrol group，Cell ALP activity ol/L diethylstilbestrol. Conclusions Diethylstilbestrol has an enhancing effect on the proliferation and osteogenic differentiation of bone marroal cells. 　　Key arroal cells; osteogenic differentiation 　　目前，随着我国逐步进入老龄化社会,老年女性的骨质疏松等疾病的发病率明显上升，究其原因可能与年龄增长后体内激素含量降低有关。然而，激素替代疗法(Hormone replacement therapy，HRT)因激素带来的诸多的副作用，使其在绝经后老年妇女中的应用受到很大的限制。已有研究表明：食用富含植物雌激素食物的亚洲人，其乳腺癌、前列腺癌及骨质疏松症等疾病的发病率较白种人低。但是，雌激素骨髓基质干细胞(BMSCs)作用的报道很少。为观察雌激素对骨髓基质干细胞的直接作用，本实验拟通过用乙烯雌酚干预体外培养的兔骨髓基质干细胞，观察其对骨髓基质干细胞成骨分化的影响，初步探索雌激素对骨骼系统的作用及其作用机制。 　 　1 材料和方法 　　1.1 主要材料 新西兰长耳白家兔(由辽宁医学院动物饲养中心提供)，LG-DMEM(低糖DMEM，Gibco BRL)，FBS(胎牛血清，杭州四季青)，全自动生化仪，茜素红试剂盒(北京科美东雅公司)，TRIzol(细胞裂解液，Katara Ltd.USA)，胰酶、MTT(噻唑兰)、DMSO(二甲基亚砜)、Diethylstilbestrol(乙烯雌酚)，其余试剂均为国产分析纯。 　　1.2 细胞培养 　　1.2.1 提取BMSCs 取1周龄新西兰长耳白家兔，将家兔拉颈处死，75%酒精浸泡10 min，用碘伏消毒，之后无菌条件下取双侧股骨和胫骨，切除两端骨骺，显露骨髓腔。DMEM培养液冲洗骨髓腔，收集骨髓细胞悬液，用Percoll 分离骨髓中的有核细胞，1 000 r/min离心5 min，再用DMEM洗1 次，收集BMSCs进行原代培养。 　　1.2.2 BMSCs原代培养 取材成功后，将收集到的纯