亚砷酸对人肺腺癌细胞的体外抑制作用及机制研究.doc

　　亚砷酸对人肺腺癌细胞的体外抑制作用及机制研究 ：叶小卫，陈瑶，叶会丽，陈林香 【摘要】【目的】探讨中药砒霜有效成分亚砷酸的体外抑瘤作用及机理。【方法】以体外培养的人肺腺癌细胞株（LAC）细胞为研究对象，选用对数生长期细胞，培养?24?h?后，分别加入不同浓度的亚砷酸（075、10、15、?20?mg／Ｌ)，并设模型对照组；采用倒置相差显微镜观察细胞形态，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测LAC细胞的生长抑制率；酶联免疫吸附（ELISA）法检测p53基因的表达变化情况。【结果】各浓度亚砷酸均能使LAC细胞发生凋亡特征性形态改变，能显著性抑制LAC株的增殖，且呈现一定的时间效应关系，并能显著性升高p53基因的含量（均Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）。【结论】亚砷酸抗肺癌的作用可能是通过上调p53基因的表达来诱导LAC肿瘤细胞凋亡，从而抑制LAC细胞的增殖，这可能也是中药砒霜能治疗肿瘤的机理之一。 【关键词】砒霜／药理学；亚砷酸／药理学；肺肿瘤／中药疗法；细胞凋亡；细胞培养；基因表达调控 　　 　　【Methods】Humanlungadenocarcinomacells(LAC)atlogarithmicgrog/Lrespectively.MeanodelcontrolgrouporphologicalfeaturesofLACindifferentgroupsicroscope，groinedbymethylthiazolyltetrazolium(MTT)assay，andtheexpressionofp53geneelinkedimmunosorbentassay(ELISA)method. 　　 　　【Results】AS2O3indifferentdosagesobviouslyinhibitedtheproliferationofLACinatimeeffectmanner，andmarkedlyincreasedtheexpressionofp53gene（Ｐ＜００５orＰ＜００１paredodelgroup）. 　　 　　【Conclusion】Thetherapeuticmechanismofarsenolitumfortumormaybeassociatedacology；ARSENICTRIOXIDE/pharmacology；LUNGNEOPLASMS/TCDtherapy；CELLAPOPTOSIS；CELLCULTURE；GENEEXPRESSIONREGULATION 　　中药砒霜（三氧化二砷，AS２Ｏ３）及砷制剂对肿瘤的治疗是近年来的研究热点，特别是对白血病的治疗已为人们所关注。砷作为抗肿瘤药物在我国已有百年历史，中药传统方剂青黄散、十味丸等治疗不同类型的白血病确有一定疗效，经鉴定其中有效成分为含砷中药。近年来的实验与临床研究发现，三氧化二砷对肺癌有良好的抗肿瘤作用，其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡、抑制其增殖、逆转耐药等有关［1-5］，但其治疗肺癌的确切机理未完全阐明。近年来临床上将亚砷酸（化学成分：三氧化二砷）用于治疗肺癌已取得一定的效果，故本研究试图通过体外培养人肺腺癌细胞株（LAC）作为研究对象，观察亚砷酸对LAC细胞形态及p53基因表达的影响，以了解亚砷酸用于治疗肿瘤的机理。 　　 　　１材料和方法 　　11细胞株、药物与试剂LAC细胞株由广州军区总医院分子肿瘤学研究所细胞室提供；亚砷酸注射液，批号由哈尔滨伊达药业有限公司生产；胎牛血清（FSC）为中国医学科学院血液学研究所产品；RPMI1640培养基、乙二胺四乙酸（EDTA）、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、四甲基偶氮唑盐（MTT）均为GIBCO公司产品；人p53定量酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司。 　　12细胞培养将冻存的LAC株按常规方法复苏，接种于RPMI1640培养液（含体积分数为10％FSC、100?U/mL青霉素、100?mg/mL链霉素）中，于37℃、体积分数为5%CO2浓度及饱和湿度的恒温培养箱中培养，细胞呈单层贴壁生长，每?2～３?d?传代1次；传代时用?025?g／Ｌ?的胰蛋白酶和?02?g／ＬＥＤＴＡ?消化?2～３?min，以培养液吹打制成细胞悬液，接种至?50?mL?培养瓶，至细胞生长旺盛后，取对数生长期细胞用于实验。 　　13细胞形态观察选用对数生长期细胞，用胰蛋白酶消化后，采用培养细胞计数法，用1640液稀释成2×105?/mL浓度的细胞悬液接种至50?mL培养瓶；置于37℃、体积分数为5％CO2及饱和温度的恒温培养箱中培养?24?h?后，实验组分别加入各种浓度（075、10、15、20?mg/