人λ干扰素在BHK21中的表达及生物学活性的研究.doc

　　人λ干扰素在BHK21中的表达及生物学活性的研究 ：严玉兰, 刘洋, 曹文雁, 步雪峰 步志高, 郑金旭 【摘要】 目的: 研究HuIFNλ1和HuIFNλ2真核细胞重组表达及其生物学活性。方法: 用水疱性口炎病毒（VSV）刺激人宫颈癌HeLa细胞, 用RTPCR克隆HuIFNλ1和HuIFNλ2基因, 与PCAGGEGFP真核表达载体连接, 构建重组体PCAGGHuIFNλ1和PCAGGHuIFNλ2并进行鉴定, 后在BHK21细胞进行表达, 采用VSV*GFP于人肺腺癌A549上进行表达产物抗病毒活性测定; 并通过已构建的MDBKMxpLuc细胞系对HuIFNλ1和HuIFNλ2诱导MxA抗病毒蛋白产生的特性进行研究。结果: HuIFNλ1PMD18T Vector和HuIFNλ2PMD18T Vector的SacⅠ、 XhoⅠ和SacⅠ和SalⅠ双酶切鉴定, 均出现610 bp大小的带, 测序示与GenBank上报道的序列完全一致。PCAGGHuIFNλ1活性104 IU/mL, PCAGGHuIFNλ2活性为102 IU/mL, 且PCAGGHuIFNλ1诱导Mx抗病毒蛋白的表达一定时间内随时间延长表达不断增强, 9～12 h达高峰, 24 h后消失（Plt;0.05）。结论: 成功构建了PCAGGHuIFNλ1PCAGGHuIFNλ2 的真核表达载体并在BHK21细胞中得到表达, 其抗病毒活性与诱导Mx抗病毒蛋白密切相关。 【关键词】 干扰素λ; 基因转染; 生物活性 ［Abstract］ AIM: To construct the eukaryotic expressing vector PCAGG HuIFNλ1 and PCAGGHuIFNλ2 and to study the biological activity of HuIFNλ1and HuIFNλ2. METHODS: The cDNA fragment encodding HuIFNλ1 and HuIFNλ2 plified from the total RNA extracted from virusinduced HeLa cells by RTPCR. Then it easure the antivirus activity.The constructed cell line MDBKMxpLuc ed by SacⅠand XhoⅠ ed by SacⅠ and SalⅠ. The fragments L and 102 IU/mL, respectively. The protein expressed by PCAGGHuIFNλ1 and PCAGGHuIFNλ2 induced the expression of the antivirus protein MxA. The expression of protein MxA induced by PCAGGHuIFNλ1 increased e, reaching the peak during 9 to 12 hours and disappearing in 24 hours. CONCLUSION: The eukaryotic expressing vector of PCAGGHuIFNλ1 and PCAGGHuIFNλ2 has been successfully constructed and transiently expressed in BHK21 cells. The antivirus activity of the products is closely correlated L, PCAGGHuIFNλ2活性为102 IU/mL, 且PCAGGHuIFNλ1诱导Mx抗病毒蛋白的表达一定时间内随时间延长表达不断增强, 9～12 h达高峰, 24 h后消失（Plt;0.05）。结论: 成功构建了PCAGGHuIFNλ1PCAGGHuIFNλ2 的真核表达载体并在BHK21细胞中得到表达, 其抗病毒活性与诱导Mx抗病毒蛋白密切相关。 ［关键词］干扰素λ; 基因转染; 生物活性 Kotenko和Sheppard等2003年相继报道一组新型干扰素家族IFNλs, 包括IFNλ1、 IFNλ2和IFNλ3 3个成员（又称IL29、 IL28A 和IL28B）［1, 2］。IFNλs作为干扰素家族中的新成员, 具有与Ⅰ型干扰素类似的信号转导通路和生物学活性, 两者都是通过诱导受体异二聚体