吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用.doc

　　吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用 ：张利众 赵瑞景3 刘建坤 高书涛 朱铁年 【摘要】 目的 探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用及机制。方法 雄性ethods Male ) rat models ly divided into diabetic model and diabeticPDTCtreated groups. After the rats ined and livers RNA odel group alcontrol group(Plt;0.01), and no difference existed betodel group(Pgt;0.05). PDTC significantly reduced liver cell steatosis and damage pared odel group. The expression of iNOS mRNA odel group(Plt;0.01), and the expression in diabeticPDTCtreated group odel group(Plt;0.01). Conclusions PDTC can reduce the expression of iNOS mRNA and liver steatosis and injury. 　　【Key ate;Diabetes;Fatty liver;iNOS 　　 随着糖尿病患病率的增加，出现糖尿病并发症的患者逐年增多。对于糖尿病并发症人们关注最多的是血管及神经系统病变，而对于糖尿病合并肝脏病变研究较少，有研究表明糖尿病患者中合并肝脏病变高达50%以上〔1〕。本文从氧化损伤角度探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)对糖尿病肝脏病变的治疗作用及机制。 　 　1 材料与方法 　　1.1 材料 链脲佐菌素(STZ)及PDTC，均购自美国Santa Cruz公司，PCR试剂盒购自Promega公司。清洁级雄性)模型的建立 参照Reed等〔2〕方法建立T2DM大鼠模型。所有大鼠适应性喂养普通饲料1 g/kg一次性腹腔注射，共有23只大鼠成模，后随机分为两组，11只为T2DM模型组，12只为PDTC治疗组。PDTC治疗组给予PDTC腹腔注射治疗(50 mg/kg)，1次/d，连续治疗1 g/kg)腹腔注射治疗，其他组给生理盐水腹腔注射。断头处死，分别留取标本。 　　1.2.2 血液指标的测定 每组随机选取6只，处死时留取血液，分离血清，用自动化分析仪测定甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、游离脂肪酸(FFA)含量。 　　1.2.3 肝脏HE染色 在肝右叶取肝组织块，用10%中性甲醛固定，常规脱水，石蜡切片，HE染色，在光镜下观察肝脏形态学改变。 　　1.2.4 RTPCR 测定诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平 使用Trizol试剂抽提组织中的总RNA，测定浓度，逆转录为cDNA。根据GenBank中大鼠源iNOS，βactin全长设计引物。iNOS 5′ACCTGGGGAACACCTGGGGATTTT3′(正义链)， 5′GCTGGGTGGGAGGGGTAGTGATGT3′(反义链)。内参照βactin：5′GAAGGTGAAGGTCGGAGTC3′ (正义链)， 5′GAAGATGGTGATGGGATTTC3′(反义链)。按照PCR反应试剂盒说明书，配制25 μl PCR反应液，反应条件：95℃预变性5 min，94℃30 s，55℃30 s，72℃30 s，进行30个循环，最后72℃延伸5 min。取各目的基因扩增产物8 μl，经2%琼脂糖凝胶电泳，iNOS和βactin的PCR产物分别为218 bp和220 bp，紫外灯下观察并拍照。采用Image J 图像分析系统进行产物灰度图像分析，以iNOS与βactin的电泳条带光密度值的比值作为相对表达量。 　　1.3 统计学方法 实验数据以x±s表示，使用SPSS13.0统计软件，采用方差齐性检验，组间比较采用单因素方差分析。 　 　2 结 果 　　2.1 各组大鼠生化指标检测 模型组大鼠TC、TG、LDLC、FFA水平均明显高于对照组，且差异显著(均Plt;0.05)，经PDTC治疗后血TC、LDLC、FFA略有下降，但与模型组比较差异无统计学意义(均Pgt;0.05)，但是TG下降明显，且与模型组比较差异有统计学意义(Plt;0.05)。见表1。 　　2.2 肝脏组织HE染色 正常组肝小