大鼠创伤组织中CGRP，VEGF表达的变化及意义.doc

　　大鼠创伤组织中CGRP，VEGF表达的变化及意义 ：周建清， 王永忠， 蒋红艳 【摘要】 目的： 探讨创伤组织中降钙素基因相关肽（CGRP），血管内皮生长因子（VEGF）表达与损伤时间的相关关系。方法： 应用免疫组织化学方法、图像分析技术动态检测大鼠创伤组织中CGRP，VEGF的表达。结果： 生前创伤组（1，2，4，8，12，24 h）大鼠皮肤组织内 CGRP在神经纤维中表达明显高于正常对照组 （P＜0.05），死亡组大鼠皮肤组织中CGRP表达与正常对照组比较无明显变化（Pgt;0.05）。生前损伤组中CGRP表达在损伤后1 h明显增多，4 h达到高峰,8 h开始下降，以后逐渐恢复到正常。VEGF 在损伤后8 h皮肤组织中开始表达,72 h表达最强 (P＜0.01),96 h开始下降。结论： 损伤组织中CGRP表达明显早于VEGF，而且具有时间的 规律 性，可作为早期创口损伤时间推断中的重要指标。 【关键词】 大鼠； 降钙素基因相关肽； 血管内皮生长因子； 免疫组织化学方法 ［Abstract］ Objective: To investigate the relationship of the time of injury and the expressions of calcitonin generelated peptide(CGRP) and vascular endothelial gromunohistochmisty technique and MIAS image analysis system. Results： The expression of CGRP in neurofibrils in the ortem injury group, there mounreactivities in neurofibrils pared to the control group(Pgt;0.05). Further, the expression of CGRP could be detected increasingly in 1 h, and reached maximum in 4 h, returned in 8 h， then returned to normal there after. Hoaximun in 72 h(P＜0.01),then returned in 96 h. Conclusion： The expression of CGRP e dependent. It could used as a biomarker to determine the time of injury in the early munohistochemistry 损伤时间推断是法医实际工作中非常重要的内容，但又一直是困扰法医工的一大难题。中枢及周围神经损伤后可引起中枢及外周部位降钙素基因相关肽 (calcitonin generelated peptide，CGRP)的表达变化，而 CGRP 的表达程度与神经损伤及修复再生的情况有一定的相关性。血管内皮细胞生长因子 (vascular endothelial gro做切创，长约 5 cm，深及筋膜。在相应时间段颈椎脱位法处死大鼠，迅速取下大小为 1.5 cm×1.5 cm伤区组织，置 4%低聚甲醛 0.1 mol/L PBS中，4℃固定。 1.2 试 剂 一抗CGRP，VEGF抗体均购自美国Sigma公司；二抗及SABC试剂盒均购自武汉博士德生物技术公司。 1.3 对照组的设立 在本实验中分别设立正常组织对照，远离创区的组织对照 （创周5 mm以外），不加抗体对照及阳性对照。 1.4 免疫组化 采用链霉素亲和素－生物素－过氧化酶复合物法（SABC）。切片首先用80%甲醇(内含0.3%Ｈ2Ｏ2)于室温处理20 min以去除内源性过氧化氢酶, 而后用0.3%Triton X100于室温处理20 min以增加膜通过性, 然后将切片与抗体孵育, 所有抗体均用含有0.3% Triton X100和1%正常羊血清白蛋白的磷酸缓冲液稀释。切片首先与一抗兔抗大鼠CGRP抗体(效价为1∶800)在4℃冰箱放置2 d, 而后分别与二抗(效价1∶500)和ABC复合物在室温条件下孵育4 ｈ, 以上每一步间隙均用0.01 mol/Ｌ PBS充分洗涤(5 min×3次)。最后切片按试剂盒说明书进行染色。使用已知阳性切片做阳性对照，阴性对照用PBS代替一抗。 1.5 统计学处理 各组实验数据用±s表示，应用SPSS11.5软件进行单因素方差分析，两两比较用t检验。 2 结 果 2.1 CGRP免疫组化观察 生前创伤组大鼠皮肤组织中