帕金森病大鼠脚桥核中胆碱能M2受体的表达变化及意义.doc

　　帕金森病大鼠脚桥核中胆碱能M2受体的表达变化及意义 ：惠艳娉，向莉，张巧俊，央珍，李小颖，吴仲恒，袁海峰 【摘要】 目的 通过免疫组织化学方法观察胆碱能M2受体在帕金森病(Parkinsons disease, PD)模型大鼠脚桥核(pedunculopontine nucleus, PPN)中的表达变化，探讨胆碱能M2受体在PD发病机制及病理生理改变中的作用。方法 选用健康雄性SD大鼠16只，随机分为2组。取脑组织固定后作连续冠状冰冻切片。以鼠源M2单克隆抗体为一抗，采用免疫组化SP法，镜下控制显色。以阳性细胞计数及平均光密度为分析指标，对M2受体在PD模型大鼠PPN中的表达变化进行观察分析。结果 对照组大鼠PPN部位及PD大鼠未损毁侧PPN部位均表达比较丰富的M2受体阳性细胞。PD大鼠损毁侧PPN部位M2受体阳性细胞明显稀疏。与对照组和PD大鼠未损毁侧相比有明显差异(Plt;0.05)。3组间阳性部位的表达强度无明显差异(Pgt;0.05)。结论 PD状态下PPN内存在表达M2受体的神经元变性死亡或受体脱失。而其余未发生变性死亡或受体脱失的M2受体阳性神经元其表达强度并不受影响。同时发现，影响PPN内M2受体阳性细胞变化的因素具有单侧性。 【关键词】 帕金森病；6羟多巴胺；脚桥核；胆碱能M2受体 　　ABSTRACT: Objective To investigate the altered expression of muscarinic receptor 2 (M2 receptor) in the pedunculopontine nucleus (PPN) of Parkinsons disease (PD) model rat by immunocytochemical technique and explore the role of M2 receptor in etiopathogenesis and pathophysiological changes of PD. Methods Sixteen healthy SD rats ly into tonoclonal antibody against the M2 receptor odel rats. Results The counting of M2 receptor positive cells in the PPN al rats and the unlesioned side of PD rats (Pgt;0.05), al rats and the lesioned side of PD rats, respectively (Plt;0.05). Hoine; pedunculopontine nucleus (PPN); M2 muscarinic receptor 　　帕金森病(Parkinsons disease, PD)是一种进行性的神经系统变性性疾病。病理变化为黑质致密部(substantia nigra pars pacta, SNc)的色素脱失和多巴胺能(dopamine, DA)神经元的大量死亡，继之引发基底节功能环路调控异常[12]。脚桥核(pedunculopontine nucleus, PPN)位于中脑脑桥被盖区，由形态和功能上异质性的多类神经元组成。其中数量最多的为胆碱能神经元，PPN神经元上有M2、M3和M4受体亚型表达，其中以M2居多[35]。研究表明PD中步态和姿势的变化或者还包括强直和运动过缓都与PPN的变化相关[34]。以往的研究显示胆碱能受体激动剂可抑制PPN胆碱能神经元进而导致运动减少，认为PPN中的M2受体主要对PPN神经元活动起抑制性的调节作用[67]。但新近的一些研究发现，在高浓度胆碱能受体激动剂作用下，M2受体也可对细胞起兴奋作用[78]。然而关于PD时PPN中M2受体的变化目前报道并不多。为此，本实验通过免疫组织化学方法观察胆碱能M2受体在PD模型大鼠PPN中的表达变化，探讨胆碱能M2受体在PD发病机制及病理生理改变中的作用。 　 　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　实验选用健康雄性SD大鼠(260～325g)16只，由西安 交通 大学医学院实验动物中心提供。大鼠在标准环境饲养，室温20～25℃，24h昼夜循环光照，自由摄食饮水，预养1周后，随机分为对照组(n=8)和PD组(n=8)。 　　1.2 模型的建立和检验 　　以Paxinos2单抗以2g/L TritonX100PBS稀释4℃ 48h。⑥PBS(0.1mol，pH 7.4)10min×3。⑦羊抗鼠二抗工作液室温2h。⑧PBS(0.1mol，pH 7.4)10min×3。⑨SP工作液室