急性髓性白血病病人外周血中RIZ1的表达变化与启动子区甲基化相关性的研究.doc

　　急性髓性白血病病人外周血中RIZ1的表达变化与启动子区甲基化相关性的研究 ：姚晨, 方娟娟, 高丽丽, 丁家华, 束国防, 余卫平 【摘要】 目的：研究急性髓性白血病病人外周血中肿瘤抑制基因RIZ1的表达状况和该基因启动子区甲基化状态及两者之间的关系。方法：以37例初发急性髓性白血病病人和15例正常人外周血标本为研究对象。RTPCR检测RIZ1 mRNA水平,甲基化特异性PCR(MSP)检测RIZ1基因启动子区甲基化状态。结果:急性髓性白血病病人标本与正常人标本比较,RIZ1基因的表达下降,差异具有统计学意义(Plt;0.05)。急性髓性白血病标本中RIZ1基因启动子区甲基化率为29.7%(11/37)。存在甲基化的急性髓性白血病病人外周血标本中,RIZ1基因表达缺失或降低。结论：RIZ1基因表达下降与急性髓性白血病的发生有关, 其部分机制在于基因启动子区甲基化。 【关键词】 急性髓性白血病; RIZ1基因; DNA甲基化 　　[Abstract] Objective: To investigate the expression of RIZ1 gene in acute myeloid leukemia and to analyze the relationship betoter hypermethylation of RIZ1 gene. Methods: The expression of RIZ1 mRNA in peripheral blood from 37 patients of primary acute myeloid leukemia samples and in peripheral blood from 15 normal persons samples erase chain reaction(RTPCR). Methylationspecific PCR(MSP)ethylation of RIZ1 gene promotor region. Results: pared al person, the RIZ1 gene expression level decreased significantly in acute myeloid leukemia(Plt;0.05). The Methylation rate yeloid leukemia. The expression of RIZ1 mRNA yeloid leukemia samples oter methylation. Conclusion: Doportant role in the development of acute myeloid leukemia, and this alteration is partially caused by RIZ1 gene promoter methylation. 　　[Key yeloid leukemia; RIZ1gene; DNA methylation 　　RIZ1是定位于1p36的一个肿瘤抑制基因, 属于核蛋白甲基转移酶超家族成员。RIZ1失活在多数肿瘤中常见, RIZ1 mRNA表达下降或缺失常与RIZ1启动子区甲基化有关。研究已经发现,肿瘤抑制基因RIZ1 mRNA表达缺乏既见于急性髓性白血病细胞株AML193又见于慢性髓性白血病细胞株K562,提示该现象属于髓性白血病的分子改变之一。采用转基因方法证实RIZ1具有髓性白血病细胞凋亡诱导作用[1]。本研究收集急性髓性白血病病人外周血标本,对RIZ1 mRNA及其甲基化状态进行检测,旨在探讨急性髓性白血病病人RIZ1基因的表达状况及其甲基化状态。 　 　1 材料与方法 　　1.1 标本的 　　37例急性髓性白血病病人外周血标本取自东南大学附属中大 医院 血液科发病初期的病人,其中男21例,女16例,中位年龄44岁。按FAB标准分型：M15例,M211例,M38例,M510例,M63例。15例健康志愿者的外周血标本作为正常对照,中位年龄38岁。 　　1.2 方法 　　1.2.1 RIZ1 mRNA的检测 (1) 单个核细胞分离与裂解：取肝素抗凝血5～10 ml, 生理盐水缓冲液稀释后,用相对密度为1.077的淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,经生理盐水洗涤后Trizol裂解,-80 ℃保存。(2) 提取总RNA：采用Trizol试剂盒(美国Invitrogen公司)并按其说明操作。通过紫外分光光度计(HITACH U2001)测RNA纯度和浓度。取OD260 nm/OD280 nm值在1.8～2.0范围内的产物进行逆转录。(3) cDNA的合成：按TaKaRa RTPCR试剂盒说明书操作,取2.