急性髓细胞白血病FLT3ITD基因突变的检测及其临床意义.doc

　　急性髓细胞白血病FLT3ITD基因突变的检测及其临床意义 ：尹列芬，王晔，姚锦，黄桂云，瞿晓媛，杨玲 【摘要】 目的 探讨急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者人Fms样酪氨酸激酶3内部串联重复(Fmslike tyrosine kinase3intenal tandem duplication, FLT3ITD)基因突变及其临床意义。方法 采用聚合酶链反应变性高效液相色谱(polymerase chain reactiondenaturing high performance liquid chromatography, PCRDHPLC)方法检测60例初治AML患者和10例对照组骨髓FLT3ITD基因突变。结果 60例AML患者FLT3ITD突变阳性率21.67%(13/60)，10例对照组均未检测到该突变;FAB各亚型FLT3ITD突变率不同，有M3型突变率较高的趋势;FLT3ITD阳性组外周血白细胞数、骨髓白血病细胞比例高于FLT3ITD阴性组(Plt;0.01);FLT3ITD阳性组完全缓解(CR)率低于FLT3ITD阴性组(Plt;0.05)。结论 FLT3ITD基因突变多见于M3患者，FLT3ITD阳性者具有外周血白细胞数、骨髓白血病细胞比例高、CR率低的特点。FLT3ITD基因突变可作为预测AML预后的一个指标。 【关键词】 急性髓细胞白血病;FLT3;内部串联重复;基因;聚合酶链反应变性高效液相色谱技术 　　ABSTRACT: Objective To investigate the mutation of FLT3 internal tandem duplication (ITD) in patients yeloid leukemia (AML) and its clinical significance. Methods The mutation of FLT3ITD in bone marroples from 60 patients erase chain reaction denaturinghigh performance liquid chromatography (PCRDHPLC). Results There utation, utation rate, and M3 had an obviously higher mutation rate than other subtypes. The peripheral arroutation than in those ission rate utation than those utation is likely to occur in M3 of AML patients. FLT3ITD mutation is associated arroission rate pared utation. The detection of FLT3ITD mutation may be used as an index of AML prognosis. 　　KEY L)时，于1996年首先报道。为探讨AML患者FLT3ITD的突变情况，我们采用聚合酶链反应变性高效液相色谱(polymerase chain reactiondenaturing high performance liquid chroma 　　tography, PCRDHPLC)技术检测60例初治AML患者骨髓FLT3ITD的突变情况并分析其临床意义。 　 　1 材料与方法 　　1.1 研究对象 60例初治AML患者，诊断及疗效标准参照《血液病诊断及疗效标准》[5]。男27例，女33例，中位年龄48岁(18～79岁)。FAB分型为M0 3例，M1 3例，M2 14例，M3 13例，M4 13例，M5 12例，M6 2例，M7 0例。老年AML 30例(年龄gt;60岁)，非老年AML 30例，正常人及良性血液病患者为对照组共10例(3例健康人，5例缺铁性贫血患者，2例特发性血小板减少性紫癜患者)。 　　1.2 实验方法 采用聚合酶链反应变性高效液相色谱(PCRDHPLC)方法。①DNA制备。取患者骨髓液2mL，应用美国Promega公司DNA提取试剂盒抽提总DNA。测定吸光度A260nm/A280nm值，确定DNA的纯度及浓度，并以去离子水稀释DNA样本为1g/L。②PCR扩增。应用Primer Express V2.0软件包以13号染色体外显子14、15设计引物，包括整个近膜区(JM)和激酶结构起始部分，扩增产物为329bp。引物由上海捷瑞公司合成，正义引物：