05-细菌芽孢与荚膜染色.ppt

微生物实验;一、实验目的 ;二、原理： ; 2、芽孢菌体的特点：不能繁殖的休眠体，含水少、含脂高、致密不透明，对不良环境有很强的抵抗能力。 有的芽孢在一定条件下可保持活力数年甚至数十年之久。条件适宜时能重新萌发。 芽孢尤其能耐高温： 枯草杆菌的芽孢，在沸水中可存 活1小时； 破伤风芽孢杆菌可在沸水中存活 3小时； 肉毒梭状芽孢杆菌的芽孢可在沸水 中存活6小时，即使在1800C干燥箱中仍可存活10分钟。 ? 芽孢可作为培养基灭菌彻底与否的检验依据。;3、芽孢的大小、位置具有分类鉴定上的意义：;能形成芽孢的细菌种类;4、芽孢染色的原理： 利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。 细菌的芽孢壁比营养细胞的细胞壁厚，致密、通透性低，着色和脱色都比营养细胞困难。 ; 一般采用碱性染料（孔雀绿）并在微火上加热或延长染色时间，使菌体和芽孢同时都染上色后，再用水冲洗脱去菌体的染料，此时仍保留芽孢的着色，并用对照染料来染菌体，这样就将芽孢和菌体分别染成两种不同的颜色。; （二）荚膜染色法： 有些细菌生活在一定营养条件下，可向细胞壁表面分泌一层松散透明、疏松、柔软、粘度极大，粘液状或胶质状的物质即为荚膜（Capsule）。 荚膜的化学成分主要是多糖、多肽、蛋白质、脂以及由它们组成的复合物—脂多糖、脂蛋白等。 荚膜虽不是细胞的主要结构，但它是细胞外碳源和能源性贮藏物质，并能保护细胞免受干燥的影响，同时能增加某些病原菌的致病能力，抵御宿主吞噬细胞的吞噬。 ; 荚膜染色原理：荚膜化学成分为多糖类衍生物、糖原或多肽，对染料结合力很弱，因此不易染色。一般采用负染色的方法，使细菌和背景着色，背景与菌体之间形成一透明区即荚膜。由于荚膜很薄，容易变形，在制片时一般不用加热固定。;三、材料： ;钾细菌(Bacillus mucilaginosus) 胶质芽孢杆菌;（一）芽孢染色 ⑴取枯草杆菌制成涂片、干燥、固定； ⑵用试管夹夹住玻片一端，涂层上加孔??绿3-4滴； ⑶加热5分钟使冒蒸汽，中途补加孔雀绿，勿煮干； ⑷冷却、水洗（细水）； ⑸蕃红溶液复染2 - 3分钟，水洗； ⑹干燥、镜检； ⑺结果：芽孢呈绿色，菌体呈红色。 ;（二）荚膜染色 ⑴取钾细菌一环，做成涂片，自然干燥（不能加热）， 可用吹风机冷风吹干； ⑵甲醇固定； ⑶水洗； ⑷蕃红溶液1—2分钟； ⑸水洗； ⑹自然干燥、镜检； 结果：背景红色、荚膜无色、菌体红色。 ;五、绘图： 绘出芽孢染色、荚膜染色的结果;荚膜